Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Вирус бешенства в клеточных культурах. Размножение

Новой эрой в рабиологии, как и в вирусологии вообще, можно считать внедрение в практику методики однослойных клеточных культур. Следует отметить, что для облигатного нейротропного вируса, каким является возбудитель бешенства, клетки внутренних органов не представляют оптимальной среды. При первичном внесении вируса бешенства, например, в культуру клеток почки практически не наблюдается накопления вируса.

Выяснилось, что для размножения вируса бешенства в культуре клеток экстраневрального происхождения необходима предварительная его адаптация, причем адаптация штаммов высоконейротропного фиксированного вируса требует больших усилий, чем штаммов уличного вируса. Циркулирующие в природе штаммы уличного вируса, по-видимому, имеют неодинаковые способности для адаптации к клеточным культурам. Кроме того, предварительно адаптированные к каким-либо экстраневральным клеточным культурам штаммы вируса имеют широкий клеточный диапазон активности: они легко и быстро могут быть адаптированы к различным клеточным системам.

Для адаптации штаммов фиксированного вируса могут быть рекомендованы следующие приемы: чередующиеся пассажи (in vivo, in vitro), методика диализных пробирок и смеси клеток (cell mixing technique), а также добавление в среду поликатионов (DEAE-декстрана, протамина сульфата) или облучение клеток ультрафиолетовыми лучами. Методика диализных пробирок благодаря постоянной смене поддерживающей среды позволила сохранять зараженные клетки в течение долгого времени.

Е. М. Михайловскому в нашей лаборатории удалось адаптировать к культуре первичных клеток почки сирийского хомяка (ПСХ) несколько штаммов уличного вируса бешенства путем постоянной смены среды и сохранения зараженных клеток до 76 дней. Таким образом был выведен культуральный вариант уличного вируса бешенства (штамм Мочалин), который к настоящему времени в нашей лаборатории прошел 130 пассажей, накапливается в культуре ткани до 10-7 lg LD50/0,03 мл при интрацеребральном титровании на мышах, вызывает острую инфекцию (Р. Ш. Ильясова).
Hronowski с соавт. аналогичным путем штамм уличного вируса (R-205) адаптировали к культуре первичных клеток почки собаки.

бешенство

В настоящее время известно несколько штаммов фиксированного вируса бешенства, адаптированных к культуре ткани (SAD, CVS-11, ERA, Внуково-32, Внуково-37, Flury, Pasteur, Pitman-Moore). Штамм CVS был адаптирован к культуре первичных клеток ПСХ путем чередующихся пассажей и прошел 112 серийных пассажей (Kissling, Rees). Штамм SAD также был адаптирован к культуре первичных клеток ПСХ в диализных пробирках в результате 25 чередующихся пассажей (Fenje).

Штаммы Flury HEP, Pitman-Moore адаптированы к культуре перевиваемых диплоидных клеток легких эмбриона человека (IIDCS, штамм WI-38) путем пассажей в смеси клеток (Wiktor е. а.). Depoux осуществил 66 серийных пассажей штамма Pasteur в культуре первичных клеток подчелюстных желез щенка собаки.

Значительно большее число публикаций относится к размножению в культуре первичных клеточных культур штаммов вируса бешенства, предварительно адаптированных к культуре ткани. Следует упомянуть об успешном размножении штамма SAD в культуре первичных клеток почки эмбриона поросенка (Abelseth), в культуре первичных клеток почки эмбриона овцы (Selimov, Aksenova), в культуре первичных клеток почки щенка собаки, кролика, морской свинки (Т. Л. Аксенова и др.), штамма Pasteur в культуре клеток лимфатических узлов, околоушной слюнной железы щенка (Depoux), штаммов Flury LEP, HEP в культуре первичных клеток куриного эмбриона (Л. И. Калинина, М. А. Селимов, Р. К. Сафаров).

При сравнительном изучении чувствительности к вирусу бешенства различных клеточных систем (первичные клетки ПСХ, почки щенка, морской спинки, теленка, ягненка, обезьяны, кролика, кошки, человека) более чувствительными оказались клетки ПСХ (Kissling, Rees, Аксенова и др., Е. М. Михайловский). Первичные клетки куриного эмбриона чувствительны к штаммам Flury LEP, HEP, глубокоадаптированным к организму куриного эмбриона, и менее чувствительны к классическим штаммам фиксированного вируса. Первичные клетки ПСХ по своей чувствительности, по-видимому, уступают лишь первичным глиальным клеткам из мозга эмбрионов различных животных.

Из перевиваемых клеточных линий высокочувствительными к вирусу бешенства считаются культура эпендимы мышей (ЕрО) и перевиваемые клетки почки эмбриона сирийского хомяка (ВНК-21, клон 13). Последние нашли самое широкое применение в исследовательской работе, так как титры вируса в этой культуре достигают 10-7/0,03 мл при интра-церебральном титровании на мышах, тогда как в самой чувствительной культуре первичных клеток ПСХ вирус обычно имеет титры 10-4,5 и 10-6,5 lg LD50/0,03 мл. Для выращивания вируса бешенства применены различные перевиваемые клетки.

Atanasiu соавт., Fernandes с соавт. выращивали штаммы CVS, Pasteur, Flury, Nishigara в культуре перевиваемых клеток ВНК-21 или ER эндотелия кролика, Т. А. Аксенова с соавт., Р. К. Сафаров — штаммы SAD, Flury в культуре перевиваемых клеток легких, почки, кишечника эмбриона человека или овцы. Clark сообщил об успешном размножении штаммов фиксированного вируса бешенства в культуре перевиваемых клеток холоднокровных пресмыкающихся.

- Читать "Скорость размножения вируса бешенства у вируса. Культивирование вируса гидрофобии"

Оглавление темы "Морфология вируса бешенства":
  1. Вирус бешенства в клеточных культурах. Размножение
  2. Скорость размножения вируса бешенства у вируса. Культивирование вируса гидрофобии
  3. Вирус бешенства штамма SAD. Штаммы Внуково
  4. Морфология вириона бешенства. Структура
  5. Цитоплазматические включения вируса бешенства. Тельца Бабеша — Негри
  6. Цитохимия и структура телец Бабеша — Негри. Что такое?
  7. Гемадсорбирующая и гемагглютинирующая активность вируса бешенства
  8. Химический состав и физические свойства вируса бешенства
  9. Антигены вируса бешенства. Устойчивость вируса гидрофобии
  10. Эпизоотии бешенства. Гидрофобия городского типа