Цитохимия и структура телец Бабеша

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Цитохимия и структура телец Бабеша — Негри. Что такое?

В 1966 г. Love с соавт. опубликовали основополагающие исследования по цитохимии телец Бабеша — Негри и тем самым прекратили имеющиеся в литературе разногласия. Авторы провели сравнительное изучение цитоплазматических включений, образующихся в культуре клеток эндотелия кролика (штамм CVS) и в мозге мышей, зараженных уличным вирусом бешенства (штамм NVC). Они показали, что оба вида включений окрашиваются одинаково по методу Фольгена, при окраске алциаповым синим, разведенным толуидиновым синим после нитротизации и всеми методами, основанными на связывании протеиновых групп.

Из последних только проба на гистоны была отрицательной при окраске щелочным зеленым быстрым. Включения не содержали Folgen-положительного материала и не окрашивались алциаповым синим. Они окрашивались слабо и ортохроматически разведенным толуидиновым синим после нитротизации и не окрашивались после обработки рибонуклеазой. Таким образом, было точно установлено, что цитоплазматические включения при бешенстве содержат РНК. Включения, образующиеся in vitro, окрашивались Суданом черным и периодической кислотой по Шиффу, что указывало на содержание в них липидов. Они не окрашивались прямым методом Шиффа на предформирующиеся альдегиды.

Окрашивание по Шиффу предупреждалось предварительным экстрагированием эфиром и не предупреждалось обработкой диастазами. Отсюда было сделано заключение, что эти липиды являются фосфолипидами, или гликолипидами, или их смесью.

Было доказано, что окрашивание на РНК с 0,1% водным толуидиновым синим и толуидиновым синим молибденом предотвращается путем обработки рибонуклеазой или горячей трихлоруксусной кислотой, а предварительная обработка дезоксирибонуклеазой эффекта не оказывала. Акридином оранжевым при рН 4,0 включения окрашивались в зеленый или зеленовато-желтый цвет, обработка нуклеазами (РНК-аза, ДНК-аза), экстрагирование нуклеиновых кислот горячей 5% трихлоруксусной кислотой не оказывали влияния на результаты окраски.

Поскольку в этих включениях отсутствуют мукополисахариды, то зеленое окрашивание акридином оранжевым, как полагают авторы, обусловлено связыванием краски карбоксильными группами протеина. Окрашивание в красный цвет внутренней зернистости включений, образующихся in vivo, объясняется присутствием в них РНК, так как обработка РНК-азой уменьшала степень окрашиваемости. Оказалось, что вариации в цвете при окраске акридином оранжевым зависят от концентрации водородных ионов и концентрации краски. Оба вида включений окрашивались пиронинметил зеленым в красный цвет.

Таким образом, исследованиями Love с соавт. установлено, что цитоплазматические включения как в организме животных, так и в культуре клеток, зараженных уличным или фиксированным вирусом бешенства, независимо от структуры (внутреннее строение или гомогенность) представляют собой место продукции и накопления специфического антигена вируса бешенства и содержат белок и РНК. Этот вывод подтверждается также результатами электронной и люминесцентной микроскопии. Первое время при электронно-микроскопическом изучении телец Бабеша — Негри также получали разноречивые результаты. Hottle с соавт., Croissant с соавт. в тельцах Бабеша — Негри не нашли вирусных частиц.

Р. М. Шен и соавт., Reagen с соавт. считали, что эти включения имеют структуру, напоминающую вирусные частицы. Несколько позже Matsumoto, Devies с соавт., Roots, Schultz, Atanasiu с соавт. при электронной микроскопии инфицированных вирусом бешенства тонких срезов мозга, слюнных желез или культуры клеток заметили, что морфогенез вируса бешенства регулярно ассоциируется с характерным матриксом; в цитоплазме клеток, зараженных вирусом бешенства, постоянно обнаруживаются скопления филаментозного материала низкой электронно-оптической плотности — вирусного матрикса. Муаmоto, Matsumoto сравнили тельца Бабеша — Негри под обычным световым микроскопом в срезах аммонова рога и в ультратонких срезах под электронным микроскопом.

Они установили следующее:
а) эозинофильная основа телец Бабеша — Негри идентична с матриксом, видимым под электронным микроскопом,
б) тельца Бабеша — Негри представляют собой место репликации вирионов бешенства и
в) внутренняя зернистость в тельцах Бабеша — Негри, видимая под обычным световым микроскопом, состоит из вирусных частиц, соединенных с некоторыми клеточными элементами. Hummeler с соавт. при помощи электронной микроскопии препаратов, обработанных мечеными антителами, определили, что филаментозный материал матрикса специфичен для вирусных частиц, его развитие предшествует формированию вирионов, что волокна, из которых состоит матрикс, являются нуклеокапсидом вируса бешенства. Таким образом, в свете современных представлений репликация любого штамма вируса бешенства независимо от его фиксации или степени аттенуации обязательно сопровождается формированием цитоплазматических включений.

Наконец, при исследовании препаратов мозга, слюнных желез, роговицы, культуры клеток, зараженных уличным или фиксированным вирусом, методом флюоресцирующих антител (МФА) как своеобразным иммуноморфологическим тестом убедительно доказано, что цитоплазматические включения и тельца Бабеша — Негри являются одними и теми же образованиями, содержащими специфический антиген вируса бешенства (Е. В. Клюева, Goldwasser, Kissling, Schneider). Важно отметить, что если при световой микроскопии в поле зрения микроскопа обнаруживаются единичные включения, то в том же препарате при люминесцентной микроскопии может быть выявлено множество включений; с помощью световой микроскопии невозможно распознать включения мелкие, гомогенные, без внутренней структуры.

В свете современных технических возможностей по-новому освещаются некоторые морфологические находки, которые ранее не имели удовлетворительного объяснения. Оказывается, Goodpasture еще в 1925 г. в мозгу кроликов, зараженных уличным вирусом бешенства, постоянно обнаруживал мелкие включения без внутренней структуры. Поскольку для телец Бабеша — Негри при световой микроскопии обязательным дифференциальным признаком считалось наличие внутренней зернистости, то указанные включения были обозначены тельцами бешенства (lyssa bodyes). Как было отмечено выше, в настоящее время при лисьем бешенстве обнаружение включений без внутренней структуры стало достаточно частым явлением.

Для фиксированного вируса бешенства считалось характерным обнаружение так называемых пассажных телец Лентца (Lentz). Они представляли собой дегенеративные изменения ядра крупных ганглиозных клеток аммонова рога в виде овальных, веретенообразных, округлых включений, основное вещество которых окрашивалось эозином в бледно-розовый цвет, а внутренние образования — основными красками в темно-синий цвет. По величине они были в 1,5—2 раза крупнее, чем тельца Бабеша — Негри, часто располагались вне клеток. «Ни при каких других заболеваниях у кроликов и собак тельца Лентца найдены не были». (А. И. Саватеев). Электронно-микроскопическими исследованиями подтверждено, что тельца Лентца представляют собой сильно разрушенные нервные клетки.

По Matsumoto, фиксированный вирус бешенства вызывает быстро развивающуюся, острую инфекцию ЦНС. Пораженные фиксированным вирусом бешенства нервные клетки подвергаются сильным некротическим изменениям, в них трудно найти внутриклеточные цитоплазматические включения. В то же время уличный вирус не разрушает структуру клетки, формирование внутренней зернистости телец Бабеша — Негри происходит за счет вирионов в зоне цитоплазмы, прилегающей к краю матрикса, сами тельца Бабеша — Негри образуются путем слияния мелких смежных включений.

Таким образом, термин «тельца Бабеша — Негри» как дань прошлому должен означать более узкое понятие «цитоплазматические включения», обнаруживаемые только с помощью обычной световой микроскопии, а термин «рабические цитоплазматические включения» — более широкое понятие «специфические включения», выявляемые с помощью люминесцентной и электронной микроскопии как in vivo, так и in vitro.

- Читать "Гемадсорбирующая и гемагглютинирующая активность вируса бешенства"

Оглавление темы "Морфология вируса бешенства":