Материалом для исследования являются образцы из дыхательного тракта больных, а именно: мокрота, глубокие фарингеальные мазки, бронхиальные смывы, а также раневое отделяемое, моча, смывы с предметов окружающей среды, растворы лекарственных препаратов, пробы почвы, воды, пищевых продуктов и т.п.

Мокроту перед посевом разводят физиологическим раствором хотя бы 1:2.

Бактерии В. cepacia-комплекса могут расти на обычном питательном и кровяном агарах, а также на среде Мак-Конки и ей подобных. Однако на этих средах растут и другие грамотрицательные микроорганизмы. В связи с этим для оптимального выделения В. cepacia из образцов со смешанной флорой необходимо использовать селективные среды, состав которых основывается на биохимических особенностях бактерий комплекса В. cepacia и присущей только им чувствительности к антибактериальным препаратам. В этих целях используются:

• агаровая среда собственного изготовления, обогащенная лактозой — для определения окислительной ферментации, с индикатором и с включением полимиксина В и бацитрацина в качестве селективных добавок;

• среда, содержащая лактозу и сюкрозу, казеин и дрожжевой экстракт, полимиксин, гентамицин и ванкомицин (как показали D. Henry et al., такая среда лучше доступных коммерческих селективных сред для выделения В. cepacia из мокроты больных муковисцидозом):

• коммерческий агар, содержащий кристаллфиолетовый, желчные соли, дрожжевой экстракт, тикарциллин, полимиксин В и гентамицин в качестве селективных добавок. Этот агар был предложен на основе разработанной ранее Gilligan et al. (1985) среды для выделения культур Pseudomonas cepacia (старое название В. cepacia),

• среда, содержащая такие селективные агенты, как 9-хлоро-9- (4-диэтиламинофенил)-10-фенилакридан и полимиксин В.

Отечественные авторы используют, помимо сред Мак-Конки и D. Henry, коммерческую селективную среду BCSA (Burkholderia cepacia selective agar, англ.).

Селективное выделение штаммов В. cepacia из секретов дыхательного тракта больных муковисцидозом и тестирование нестерильных неорганических растворов, содержащих предохраняющие их селективные добавки, рекомендуется производить только на коммерческих селективных средах («Агаровая основа для Burkholderia cepacia» и др.)

Медленно растущие штаммы В. cepacia на таких средах, как кровяной агар и среда Мак-Конки, могут быть пропущены на фоне быстро растущих микроорганизмов (Klebsiella spp., Р. aeruginosa или Staphylococcus spp). При этом возникает опасность загрязнения культур буркхолдерий.

Засеянные чашки с селективными средами необходимо инкубировать при 37°С в течение 48 часов, а затем — при комнатной температуре в течение 5 дней.

Для выделения штаммов комплекса В. cepacia из образцов, отобранных из окружающей среды и почв, рекомендована жидкая среда обогащения (бульон Malka) с полимиксином В.

Почти во всех указанных выше средах в качестве с селективной добавки использован полимиксин В. При этом следует учитывать, что некоторое число псевдомонад и других, устойчивых к полимиксину В грамотрицательных бактерий, также способны расти на этих селективных средах, и их идентификация должна проводиться с помощью дополнительных тестов.

Многие штаммы В. cepacia, выделенные от больных муковисцидозом, являлись ауксотрофами по отношению к единичным или многим аминокислотам. Такие мутанты возникают от прототрофных родительских штаммов и поддерживаются путем богатых источников питания в окружении воздухоносных путей больных муковисцидозом.

Идентификацию выделенных культур, подозрительных на принадлежность к комплексу В. cepacia, следует производить на основе культурально-биохимических признаков, описанных в отдельной статье на сайте. Отечественные и зарубежные авторы рекомендуют коммерческие тест-системы API 20 NE («BioMerieux», Франция), NEFERV («Lachema», Чехия), E/NE (США).

Однако ряд авторов находят, что автоматизированные биохимические тест-системы, такие как Vitek и Microscan, идентифицируют только молекулярно охактеризованные штаммы изолятов комплекса В. cepacia, в то время как API 20 NE или другие микрогалереи допускают ошибку лишь с единичными штаммами. Это мнение поддержали и D. Henry et al. (2001), заключившие, что стрипы API 20 NE были надежны для идентификации всех представителей комплекса В. cepacia, кроме В. stabilis.

Отечественные исследователи (В. А. Антонов и соавт., 2008) рекомендуют простой способ подтверждении принадлежности штаммов к комплексу В. cepacia: после получения результатов на API 20 NE следует одновременно определить аргинин-дегидролазу, лизин-декарбоксилазу и β-галактозидазу (ONPG-тест). В случае выделения В. cepacia первый тест должен быть отрицательным, а из двух остальных хотя бы один оказывается положительным.

Выявление отдельных видов (геномоваров), входящих в комплекс В. cepacia, возможно только с помощью ПЦР с группоспецифическими праймерами.

Определение чувствительности выделенных культур к антибактериальным препаратам. Чувствительность микроорганизмов В. cepacia-комплекса к антибактериальным препаратам принято определять методом двукратных серийных разведений в пробирках с мясопептонным бульоном (МПБ) или на мясопептонном агаре. При определении чувствительности В. cepacia этим методом обычно используют следующие антибактериальные препараты: имипенем, меропенем, тетрациклин, цефтазидим, ципрофлоксацин, иногда — гентамицин. Используются также сочетания препаратов — например: цефтазидим/клавулонат + пиперациллин, которые защищены ингибиторами β-лактамаз (клавулановая кислота в случае с цефтазидимом) и тазобактам — в случае уреидопенициллина-пиперациллина.

- Читать далее "Лечение и профилактика инфекции Burkholderia cepacia"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 17.4.2020