Технология производства культуральной антирабической вакцины
В нашей стране исследования по культуральной антирабической вакцине выполнялись в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН и имели следующие направления и этапы:
а) 1963—1965 гг.— изготовление лабораторных образцов вакцины и испытание ее антигенной, иммуногенной активности и безвредности в опытах на различных животных и добровольцах (Селимов и др., Selimov, Aksenova).
б) 1966—1969 гг.— организация экспериментального производства вакцины и испытание ее антигенной активности и реактогенности в опытах лечебной и профилактической иммунизации 1000 людей (М. А. Селимов и др.);
в) 1970—1973 гг.— организация серийного экспериментального производства вакцины и испытание ее эффективности и реактогенности в опытах лечебной иммунизации 10 000 человек;
г) 1974 г.— организация промышленного производства вакцины и передача ее в практику здравоохранения для лечебной иммунизации людей.
Технология производства вакцины в основном состоит из следующих этапов: трипсинизация почек, выращивание монослоя клеток, заражение клеток и их инкубирование, сбор вируссодержащеи культуральной жидкости, сведение в серию, осветление, инактивация вируса, розлив во флаконы, лиофилизация.
Трипсинизация тканей почки проводится 0,25% химически чистым раствором трипсина в специальной колбе при комнатной температуре и постоянном размешивании на магнитной мешалке. После трехкратного отмывания клетки суспендируют в 0,5% растворе гидролизата лактальбумина (ГЛА) на солевом растворе Хенкса — рН 7,0—7,1, содержащем 10% нормальной бычьей сыворотки (МБС) в концентрации 400 000 клеток в 1 мл, и в общем объеме 300 мл вносят в полуторалитровые клинские матрасы и инкубируют при температуре 37°С. Через 3 суток старую ростовую среду удаляют и заменяют таким же количеством свежей ростовой среды, но приготовленной па растворе Хенкса рН 7,0.
Спустя 5—6 сут с момента посадки матрасы со сплошным монослоем, без признаков дегенерации, отбирают для заражения: среду удаляют, клетки отмывают 3 раза 150 мл солевого раствора и вносят посевной вирус в дозе 0,01—0,001 LDso на одну клетку. Сорбция проходит при 22°С в течение часа. Затем в каждый матрас вносят 300 мл 0,5% ГЛА на растворе Эрла рН 7,4, содержащем 3% человеческого альбумина. Зараженные клетки инкубируют при 32°С. Сбор вируса проводят через сифон, начиная с 5-го дня после заражения с интервалами в 2—3 дня. Вирус собирают с матрасов со сплошным монослоем. Вируссодержащая культуральная жидкость, собранная одновременно с одной серии клеточной культуры, составляет первичный сбор.
Последний сохраняется при температуре —20°С. После соответствующих контрольных исследований проб первичного сбора составляют серию полуфабриката в объеме 15—30 л. Вируссодержащую культуральную жидкость осветляют путем центрифугирования в сепараторе типа ЛСГ-3 со скоростью протока 15 л/ч или путем фильтрации через крупнопористые фильтры. Вакцину инактивируют в иррадиаторе ультрафиолетовых лучей (УФЛ) со скоростью 65 мл/мин; расстояние от источника УФЛ до поверхности вращающегося диска 18 см. На вращающейся поверхности диска вакцина распределяется толщиной менее 1 мм (В. М. Морогова и др., 1973). Перед розливом в вакцину добавляют 10% раствор желатина и 75% раствор сахарозы, стерилизованные путем автоклавирования так, чтобы конечная концентрация желатина и сахарозы в вакцине составляла 1% и 7,5% соответственно. Вакцину разливают на поточной автоматической линии во флаконы из нейтрального стекла по 3 мл, замораживают при температуре —60—65°С и лиофилилируют.
Контролируют вакцину на производстве, в Отделе биологического контроля института (ОБК) и в ГИСК. Контрольным исследованиям подвергаются сирийские хомяки, клеточные культуры, вакцинный штамм, посевной вирус, первичный и объединенный сбор вируса и готовая вакцина. Очень большое внимание уделяется контролю на возможное загрязнение вакцины микроорганизмами, включая микоплазму (PPLO) и микобактерии туберкулеза. Путем посевов на чувствительные синтетические среды подвергают проверке клеточные культуры, вакцинный штамм, посевной вирус, первичный и объединенный сбор, готовую вакцину. Вакцинный штамм, кроме того, проверяют на антигенную специфичность (реакция нейтрализации на мышах с коммерческим антирабическим гамма-глобулином), индекс нейтрализации должен быть не ниже 4,0 LD50, спонтанные вирусы в культуре клеток ПСХ, диплоидных клеток человека, морских свинок, куриных эмбрионов, взрослых и новорожденных мышей, заражая их исследуемым материалом после нейтрализации антирабическим гамма-глобулином.
- Читать далее "Контроль иммуногенной активности вакцин от бешенства"
Оглавление темы "Вакцинация от бешенства":- Прививки от бешенства в нашей стране. Качество антирабической помощи
- Живые вакцины от бешенства. Модификация Ферми
- Инактивированные вакцины от бешенства. Вакцина Семпла
- Мозговая вакцина от бешенства инактивируемая бета-пропиолактоном (БПЛ)
- Вакцина от бешенства из мозга новорожденных животных
- Лиофилизированные феноловые антирабические вакцины
- Авианизированные антирабические вакцины
- Культуральная антирабическая вакцина. Вакцина Института Мерье
- Технология производства культуральной антирабической вакцины
- Контроль иммуногенной активности вакцин от бешенства