Дискриминация моделей процессов комплексообразования. Графические представления взаимодействия рецепторов
При количественном изучении взаимодействия лигандов с центрами связывания ключевыми проблемами являются дискриминация моделей процессов комплексообразования, а также определение значений параметров модели, адекватно описывающей процесс, и оценка их качества.
К сожалению, при исследовании рецепторных систем (и особенно иоидных рецепторов - Chang K.-U., 1984; Kosterlitz, 1985; Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985) редко встречаются случаи комплексообразования лиганда только с одним рецептором. Наличие в мембранных препаратах других типов рецепторов данного класса, к которым исследуемый лиганд имеет хотя и меньшее, но все же заметное сродство, приводит к тому, что экспериментально аблюдаемая зависимость общей концентрации связанного лига да [В] от концентрации свободного лиганда в условиях равновесия имеет вид, следствием чего является резкое возрастание трудностей определения п раметров системы К; и [Ri]o.
Таким образом, проблемы, которые возникают на первом этапе при физико-химическом исследовании системы рецепторов, условно v >жно подразделить на три группы: 1) доказательство отсутствии кооперативных взаимодействий в системе рецепторов, т.е. установление тою факта, что в условиях равновесия процесс комплексообразования протекает в соответствии с уравнением (2.3); 2) выяснение числа типов рецепторов (n), с которыми взаимодействует лиганд; 3) определение равновесных и кинетических параметров комплексообразования лигандов с рецепторами.
Для решения поставленных задач традиционно используются графические представления. В частности, критерием того, что лиганд связывается только с одним типом центров, является линейная зависимость экспериментальных данных в условиях равновесия.
Отклонение от прямой свидетельствует о том, что процесс комплексообразования соответствует модели с двумя или более независимыми типами центров связывания. В координатах Клотца (lg L, В) (Klotz, 1982) дискриминация моделей основывается на анализе количества полуволн. Достаточно разработаны приемы и методы графического определения параметров в соответствии с идентифицированными моделями (Schwarz, 1976; Cressie, 1981; Варфоломеев, Зайцев, 1982; Варфоломеев, Зайцев. Мевх, 1985; Зайцев, Курочкин, Варфоломеев, 1987). Среди указанных графических представлений при идентификации моделей комплексообразования наиболее предпочтительны координаты Скэтчарда и Иди-Хофсти, так как они наиболее чувсивительны к любым отклонениям от линейности.
Суть подхода заключается в следующем: с использованием формулы методом наименьших квадратов (МНК) в прямой системе измерений определяются параметры Ki и [Ri]o, а также среднеквадратичные отклонения S1 и S2 для более простой и более сложной моделей соответственно.
Вычисленное по формуле F-отношение в дальнейшем сравнивают с табличными значениями F-критерия для (mi-m2) и m2 степеней свободы, на основании чего и производится дискриминация моделей. Однако использование F-критерия для модели комплексообразования едва ли корректно в связи с зависимостью величин si и s2, являющихся функциями от одного и того же набора случайных данных, тем более что реальный объем эксперимента, как правило, невелик и асимптоматические формулы, приводящие к F-критерию, мало пригодны. В этой связи встает проблема поисков подходов, позволяющих более надежно определить количество центров, с которыми связывается лиганд, и найти параметры, описывающие процессы комплексообразования. Для решения данной проблемы нами разработан новый подход - метод анализа комплексообразования лигандов с центрами связывания на основе имитационного моделирования (МИМ) (Курочкин с соавт., 1984а; Зайцев, Курочкин, Варфоломеев, 1987).
- Вернуться в оглавление раздела "Фармакология"
Оглавление темы "Рецепторы центральной нервной системы":1. Рецепторно-ферментные системы. Рецепторы как датчики сигнала
2. Константы скоростей нейрогормонов. Гетерогенность популяции рецепторов
3. Усиление сигнала рецепторами. Ферментативное усиление сигнала
4. Каскадные системы усиления сигнала. Даун регуляция рецепторов
5. Инактивация лиганд-рецепторного комплекса. Двойное действие лиганда на рецепторы
6. Суперчувствительность рецепторов. Кооперативность рецепторов
7. Механизмы суперчувствительности рецепторов. Суицидные ферментные комплексы
8. Значение концентрации лиганда. Рецепторный резерв
9. Консервативность рецепторных систем. Избыточность рецепторов
10. Дискриминация моделей процессов комплексообразования. Графические представления взаимодействия рецепторов