В ряд одинаковых по размеру пробирок, начиная со второй, наливают по 0,5 мл физиологического раствора NaCl. Затем в первую и вторую пробирки вливают по 0,5 мл испытуемой сыворотки. Пипеткой путем вдувания и выдувания смешивают содержимое второй пробирки и 0,5 мл смеси из нее переносят в третью пробирку, смешивают и 0,5 мл жидкости из третьей пробирки переносят в четвертую й т. д. Таким способом получают разведения сыворотки. Из последней пробирки после тщательного смешивания 0,5 мл жидкости удаляют.

Затем в каждую пробирку добавляют по 0,5 мл спирта 96° и хорошо встряхивают. От прибавленного спирта образуется взвесь выпадающего белка в алкогольной вытяжке билирубина. После спирта в каждую пробирку добавляют по 0,5 мл диазореактива (свежеприготовленная смесь обоих растворов, как указано в определении по ван ден Бергу) и встряхивают. Через 2—3 минуты учитывают, в какой пробирке имеется розовое окрашивание. Чтобы розовый цвет последней пробирки был лучше заметен, в последние 3—4 пробирки, в которых жидкость от розоватой постепенно становится совершенно бесцветной, пипеткой наслаивают по 0,5 мл эфира. На белом фоне отмечают разницу в окраске верхнего эфирного бесцветного слоя и нижнего, окрашенного в розовый цвет.

Количество билирубина в последней пробирке, имеющей еще розоватый оттенок, соответствует 0,016 мг билирубина в 1 мл или 1,6 мг в 100 мл сыворотки. Для определения выраженного в миллиграммах количества билирубина в 100 мл данной сыворотки следует степень разведения сыворотки последней пробирки, еще дающей реакцию, помножить на 1,6.
Количество билирубина, определяемого по этому методу в норме, равно 1,6—6,25 мг%.

Реакция Таката-Ара при заболеваниях печени

Принцип реакции основан на том, что при поражении паренхимы печени изменяются белки сыворотки крови, приобретающие свойства, позволяющие им влиять на различные коллоидные растворы, нарушая их физико-химическое состояние.

Реактивы те же, что и для исследования этой реакцией спинномозговой жидкости. Реакция проводится в 4 пробирках с сывороткой, разведенной 1 : 8, 1 : 16, 1 : 32, 1 : 64.

В первую пробирку наливают 1,75 мл физиологического раствора, в остальные три наливают по 1 мл физиологического раствора. В первую пробирку наливают 0,25 мл сыворотки крови, тщательно смешивают, затем переносят из первой пробирки 1 мл жидкости во вторую пробирку, смешивают и переносят 1 мл жидкости из второй в третью пробирку, так же тщательно смешивают жидкость в третьей пробирке, переносят 1 мл ее из третьей в четвертую. Из четвертой пробирки 1 мл смешанной жидкости выливают.

Во всех пробирках, таким образом, осталось по 1 мл жидкости. Приливают в каждую из них по 1 капле 10% раствора безводной соды и по 0,3 мл тут же приготовленной смеси из равных частей сулемы и фуксина.
Учет реакции производят сразу; затем через 5, 10, 30 минут и через сутки.

При положительном результате реакции в трех первых пробирках выпадает осадок. Если осадок выпадает сразу же после прибавления реактивов, то результат реакции считается резко положительным. При выпадении осадка в течение суток результат реакции слабо положительный.
В отрицательных случаях жидкость остается прозрачной. Осадок, выпадающий в четвертой пробирке, значения не имеет.

- Читать далее "Упрощенная реакция Таката-Ара. Тимоловая проба"