Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов

Свыше 30 лет назад Куне ввел в вирусологию метод, который оказался чрезвычайно полезным и в исследовательской работе, а в настоящее время широко используется и в диагностических целях. «Флуоресцирующие антитела» представляют собой специфические иммуноглобулины, «помеченные» красителем типа флуоресцеина или родамина, флуоресцирующим при облучении ультрафиолетовым или синим светом.

Связывание (конъюгацию) красителя и белка можно достаточно легко осуществить в лаборатории с помощью стандартной методики; препараты иммуноглобулинов, коиъюгированных с флуоресцеином, поступают также в продажу. Существует три основных варианта этой методики.

Прямая иммунофлуоресценция (А—аф). Вирусный антиген (А) (в виде, например, фиксированного ацетоном зараженного вирусом монослоя клеток на покровном стекле) обрабатывают конъюгированной с флуоресцеином антивирусной сывороткой {аф). Избыток ар отмывают и клетки просматривают с помощью микроскопа, снабженного сильным источником света (лампа с парами ксенона или ртути) и фильтром, задерживающим лучи всех длин волн, кроме коротковолновых.

иммунофлуоресценция вирусов

Между объективом и окуляром вводят дополнительные фильтры, которые поглощают все синие и ультрафиолетовые лучи; таким образом, препарат выглядит черным, за исключением тех мест, где флуоресцеин излучает зелено-желтый свет.

Непрямая иммунофлуоресценция (А—а—гф). Для этого метода, иногда называемого методом «сэндвича», характерно то, что антивирусные антитела (а), не меченные красителем, выполняют роль «начинки в сэндвиче». Они связываются как с антигеном (А), так и с антигаммаглобулином, конъюгированным с флуоресцеином (гф), который добавляют в конце реакции. Например, если в качестве антивирусной сыворотки берут сыворотку человека в период выздоровления, то целесообразно использовать глобулин (г), полученный путем иммунизации коз или кроликов нормальным человеческим глобулином.

Непрямой метод иммунофлуоресценции более чувствителен, чем прямой, и, что особенно важно в диагностике, для тестирования взаимодействия любого антигена с соответствующими антителами, образующимися в организме человека, необходим лишь один вид меченого реагента, например конъюгированный с флуоресцеином козий у-глобулин против глобулина человека.

Иммунофлуоресценция комплемента (А—а—К—гф). После того как комплекс антиген—антитело свяжет комплемент, в систему вносят конъгогированнкй с флуоресцеином иммуноглобулин против комплемента. Метод сопряжен с рядом трудностей и используется не так широко, как описанные выше варианты.

Иммунофлуоресценция обладает двумя основными преимуществами по сравнению с другими серологическими методами. В исследовательской работе этот метод позволяет определить, какие клетки в органе содержат вирус, и установить локализацию специфических вирусных антигенов в зараженной клетке. Несмотря на то что трудности, обусловленные неспецифической флуоресценцией, несколько задерживают широкое внедрение метода в диагностических лабораториях, он имеет большие возможности для ускоренной идентификации вируса как непосредственно в материале, полученном при биопсии или аутопсии, так и после пассирования вируса в культуре клеток.

- Читать далее "Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов"

Оглавление темы "Выявление вирусов":
1. Критерии чистоты вирусных препаратов. Радиоактивные изотопы в изучении вирусов
2. Электронная микроскопия вирусов. Гибридизация вирусов
3. Гибридизация ДНК вирусов. Нуклеиновые кислоты вирусов
4. Диагностика вирусных нуклеиновых кислот. Белки вирусов
5. Белковый состав морфологических субъединиц вирусов. Оболочки и ферменты вирусов
6. Антитела и антигены вирусов. Нейтрализация вирусов
7. Торможение гемаглютинации вирусов. Выявление вирусов диффузией в геле
8. Связывание комплемента для выявления вирусов. Техника связывания комплемента
9. Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов
10. Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.