Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов

Развитие радиоиммунологических методов анализа антигенов и антител было обусловлено получением препаратов радиоактивных изотопов без носителей, особенно изотопов иода, который легко присоединяется к тирозиновым остаткам в молекуле, белка. Радиоиммунологические методы высокочувствительны; например, метод радиоавтографии клеток, меченных радиоактивными по 125I антигеном или антителами, более чем в тысячу раз чувствительнее методов с использованием флуоресцирующих антигенов или антител.

Кроме того, радиоиммунологические методы очень точны и несложны в исполнении. Один из двух главных реагентов, антиген или антитело, помечен изотопом, поэтому за ним легко следить с помощью стандартных процедур, например радиоавтографии или сцинтилляционного счетчика. При этом необходимо выполнять три основных требования: 1) один из реагентов, антиген или антитело, должен находиться в чистом виде; 2) степень насыщения белка иодом должна быть низкой (менее двух атомов иода на молекулу белка с молекулярным весом 40 000 дальтон), в противном случае серологические свойства белка могут измениться; 3) процесс иодирования не должен изменять серологических свойств.

Существует два основных метода иодирования белков. При использовании первого метода добавленный к белку иодид окисляется окислителем, обычно хлорамином-Т. Эта процедура эффективна, но ее недостатком следует считать возможность легкого окисления остатков метионина, что иногда приводит к изменению серологических свойств белка.

выявление вирусов

По второму методу иодид, добавленный к белку, окисляется ферментом лактопероксидазой, внесенной в реакционную смесь (Марчалонис, 1969). Последний метод более специфичен и меньше повреждает антиген, однако белок при этом иодируется в меньшей степени.

Широко используют два типа радиоиммунологических методов: радиоиммунозлектрофорез и радиоиммунодиффузию. В основе обоих методов лежит общий принцип, состоящий в том, что глобулины, обладающие активностью антител, даже после преципитации антисывороткой против глобулина могут реагировать с антигеном. Например, для того чтобы узнать, какой класс молекул антител, специфически реагирующих с данным антигеном, присутствует в сыворотке, используют следующий подход. Препарат исследуемой сыворотки подвергают обычному иммуноэлектрофорезу в агаровом геле, нанесенном на предметные стекла. Затем в гель диффундирует антиглобулиновая сыворотка, образуя при этом дуги преципитации, соответствующие различным классам антител.

Предметные стекла с агаром и реагентами тщательно отмывают, после чего в гель диффундирует радиоактивный антиген. Стекла снова отмывают, окрашивают и радиоавтографируют. Наложив пленку с радиоавтографом на окрашенное стекло, можно идентифицировать радиоактивные дуги и тем самым специфические антитела.

Несмотря на свою полезность, эта методика не позволяет легко провести количественное определение специфических антител (или антигенов). Эту задачу можно решить несколькими способами (Хорвиц и Шарф, 1969b), один из которых заключается в следующем (Уистар, 1968). Аликвоты меченного 125I антигена (или антител) смешивают с серийными разведениями антисыворотки (или антигена), добавляют соответствующее количество антиглобулиновых антител, смесь инкубируют 3 ч при 37 °С и оставляют на 16 ч при 4 °С. Затем смесь центрифугируют в режиме, при котором осаждаются комплексы антигена, антител и антиглобулиновых антител, но не свободные антигены или антитела. Радиоактивность отмытого осадка определяют с помощью сцинтилляционного счетчика.

- Вернуться в оглавление раздела "Вирусология"

Оглавление темы "Выявление вирусов":
1. Критерии чистоты вирусных препаратов. Радиоактивные изотопы в изучении вирусов
2. Электронная микроскопия вирусов. Гибридизация вирусов
3. Гибридизация ДНК вирусов. Нуклеиновые кислоты вирусов
4. Диагностика вирусных нуклеиновых кислот. Белки вирусов
5. Белковый состав морфологических субъединиц вирусов. Оболочки и ферменты вирусов
6. Антитела и антигены вирусов. Нейтрализация вирусов
7. Торможение гемаглютинации вирусов. Выявление вирусов диффузией в геле
8. Связывание комплемента для выявления вирусов. Техника связывания комплемента
9. Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов
10. Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.