Советуем для ознакомления:

Фармакология:

Популярные разделы сайта:

Тест паралича личинок. Тесты in vitro и in vivo антигельминтиков

Биологические тесты. Тест вылупления личинок из яиц гельминтов (Р.С. Кармалиев, 1991). Технически наиболее просто выполним. Яйца гельминтов (стронгилят) культивируют в растворах с различными концентрациями антигельминтика при температуре 27 °С в течение 24 ч. Вылупление личинок из яиц гельминтов резистентного штамма происходит при повышенных концентрациях препарата по сравнению с чувствительным штаммом.

Концентрация лекарственного вещества, необходимая для гибели 50 % яиц (ЛК5о), является количественным показателем чувствительности данного штамма гельминтов к этому препарату. Величину фактора резистентности (ФР) определяют соотношением ЛД50 резистентного штамма к тестируемому. Если ФР больше 1, то тестируемый штамм гельминтов является чувствительным к данному антигельминтику, если равен 1 - устойчивым.

Для того, чтобы результаты были точными, необходимо брать культуру яиц на начальной стадии эмбриогенеза, так как препараты из группы бензимидазолов ингибируют развитие зародыша на ранней стадии, а далее он менее чувствителен к ним.

Тест паралича личинок. Этот тест используют для антигельминтиков, обладающих паралитическим действием. Инвазионных личинок нематод выдерживают в растворах с различной концентрацией антигельминтика при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем личинок исследуют под микроскопом и классифицируют как нормальные или парализованные. Чувствительность гельминтов к антигельминтику выражается в ЛК50, вызывающей паралич 50 % личинок этого штамма.

Для определения антигельминтной резистентности паразитических нематод в условиях «in vitro» в «Тесте паралича личинок» можно использовать специальное устройство «Звездочка», разработанное В.Ф. Никитиным и Павласеком. Предварительно инвазионных личинок нематод получают из фекалий животных при помощи этого устройства. Для постановки теста готовится раствор антигельминтика в разной концентрации. Затем в одну чашку Петри вносят раствор антигельминтика, а в другую — равный объем воды (контроль). Во все чашки вносят по 2 мл взвеси инвазионных личинок гельминтов условно резистентных и чувствительных штаммов в концентрации не менее 100 личинок в 2 мл. Личинок выдерживают в растворах антигельминтика 24 ч при комнатной температуре. Подсчитывают все 100 личинок, дифференцируют их как жизнеспособные (подвижные) и парализованные (без заметного движения в течение 5 с) и устанавливают летальную концентрацию (ЛК5о) препарата, которая вызывает паралич у 50 % личинок гельминтов.

антигельминтики

Кроме того, можно использовать и другие тесты:
- тест развития личинок до инвазионной стадии;
- тест развития инвазионных личинок до половозрелых особей;
- тест паралича личинок с использованием микроизмерителя подвижности;
- тест паралича личинок с использованием эзерина;
- тубулин связывающий тест.

Биохимические тесты. Антигельминтное действие некоторых лекарственных препаратов обусловлено их ингибирующим действием на ферменты гельминтов. У большинства гельминтов ключевыми ферментами энергетического метаболизма являются фумаратредуктаза и малатдегидрогеназа. Эти ферменты являются специфически уязвимыми при химиотерапевтическом воздействии препаратов. Степенью их чувствительности к антигельмин-тикам обуславливается чувствительность или резистентность гельминтов к лекарственным веществам.

Основываясь на том, что у резистентных гельминтов активность неспецифических эстераз и ацетилхолинэстеразы выше, чем у чувствительных, разработаны тесты определения чувствительности к антигельминтикам по уровням активности этих ферментов:
- тест уровня активности фумаратредуктазы;
- тест уровня активности малатдегидрогеназы;
- тест уровня активности неспецифических эстераз;
- тест уровня активности ацетилхолинэстеразы.

С их помощью определяют резистентность гельминтов к бензимидазолам, левамизолу, авермектинам и другим препаратам.

Методы тестирования антигельминтиков «in vivo»

Критический тест по снижению количества яиц в фекалиях. Эффективность антигельминтика оценивают, сравнивая количество яиц гельминтов в фекалиях до и после лечения опытных животных.

Контрольный тест. Оценку эффективности препаратов проводят через 10-14 сут после их применения, используя метод гельминтологического вскрытия животных и подсчета количества гельминтов от леченых и контрольных животных.

- Читать далее "Профилактика развития резистентности у гельминтов"

Оглавление темы "Основы антигельминтной терапии":
1. Экология антигельминтиков. Влияние антигельминтиков на окружающую среду
2. Побочные действия антигельминтиков. Предотвращение побочных эффектов
3. Противопаразитарные препараты. Лекарственные формы противопаразитарных средств
4. Повышение эффективности антигельминтиков. Факторы влияющие на эффективность антигельминтиков
5. Лекарственная форма антигельминтиков и их эффективность
6. Подбор терапетической дозы антигельминтиков. Контрольный тест антигельминтиков
7. Резистентность гельминтов. Антигельминтная резистентность
8. Тест паралича личинок. Тесты in vitro и in vivo антигельминтиков
9. Профилактика развития резистентности у гельминтов
10. Эффективные дозировки антигельминтиков для животных