При изучении взаимодействия лигандов с центрами связывания важным моментом является проверка обратимости процесса связывания (Зайцев, 1987). Результаты проведенных исследований показывают, что связывание опиатных лигандов с мембранными препаратами обратимо. Следовательно, процесс комплексообразования опиатов и опиоидных пептидов с рецепторами может быть описан схемой. Принципиальным вопросом биохимического и физико-химического исследования взаимодействия опиатных лигандов с рецепторами является определение количества различных типов опиоидных рецепторов, с которыми связывается тот или иной лиганд, а также их характеристик.

С целью выяснения числа и характеристик различных типов опиоидных рецепторов были изучены изотермы связывания опиата 3Н-морфина, опиоидного пептида 3H-D-Ala2, энкефалина с рецепторами мембранных препаратов головного мозга крыс (Зайцев и др., 1985; Зайцев, 1987; Varfolomeev, Zaitsev et a!., 1987). Анализ экспериментальных данных проводился с использованием разработанных в настоящей работе МИМ и разностного метода. Полученные результаты с учетом установленного ниже факта отсутствия кооперативных взаимодействий в системе позволяют сделать вывод о том, что опиат морфин и опиоидный пептид D-Ala2, энкефалин взаимодействуют по крайней мере с тремя независимыми центрами связывания мембранного препарата головного мозга крыс.

Итак, изотерма комплексообразования как морфина, так и D-А1а2, энкефалина соответствует связьюанию этих лигандов не с двумя, а с тремя независимыми типами центров комплексообразования. Отметим, что один из центров связывания каждого лиганда характеризуется исключительно высоким сродством (супервысокоаффинный центр) и чрезвычайно низкой концентрацией, в отличие от широко описанных в литературе (Chang et al., 1981; Doctal, 1982; Schiller, DiMaio, 1982; Cotton et al., 1985) высокоаффинных и низкоаффинных центров связывания этих лигандов.

Заметим, что существование трех независимых типов центров связывания морфина и D-Ala2, энкефалина показано нами и для среды Б (буфер А, в котором ионы натрия заменены на К+). Следовательно, супервысокоаффинный центр связывания проявляется и в отсутствие одного из регуляторов опиатной рецепции ионов Na+.

Как установлено нами выше, существование супервысокоаффинного центра связывания характерно не только для изотерм комплексообразования опиата морфина, но также и для изотерм связывания опиоидного центра пептида D-Ala2, энкефалина. Возникает вопрос: как соотносятся эти центры? Существует ли один общий центр (fi\), к которому опиаты и опиоидные пептиды имеют наивысшее сродство, как это предполагается в работах Пастернака и Лутца (Wolozin, Pasternak, 1982; Lutz et al., 1984; Munson et al., 1984), либо супервысокоаффинные центры связывания морфина отличны от супервысокоаффинных центров D-Ala2, энкефалина?

Для проверки высказанных предположений были проанализированы кривые конкурентного вытеснения меченых морфина и D-А1а2, энкефалина немечеными лигандами. При этом концентрации меченых лигандов были выбраны такими, чтобы уровень специфического связывания в основном определялся супервысокоаффинными и высокоаффинными центрами соответствующих лигандов. Последнее говорит о различном характере взаимодействия u- и 6-лигандов с супервысокоаффинным центром связывания морфина и с супервысокоаффинным центром энкефалина и позволяет предположить существование помимо су-первысокоаффинного центра связывания морфина u, супервысо-коаффинного центра, имеющего наибольшее сродство к D-Ala2, энкефалину, который по аналогии с u можно было бы обозначить как 6.

- Читать далее "Вытеснение морфином лигандов с рецепторов. Скорость взаимодействия морфина с рецепторами"