Один из методов лабораторной диагностики — выделение культуры возбудителя от больных с острым бруцеллезом. Для посева используется кровь, реже моча, желчь, костный мозг. Материал засевается на мясо-пептонный агар и мясопептонный бульон с добавлением 1% глюкозы и 2% химически чистого глицерина, а также питательный бульон и агар Д.

Для возбудителей бруцеллеза при выделении их от больных характерен крайне медленный рост на питательных средах. Посев выдерживают при 37°С в течение 30 дней, а в случае выделения В. abortus необходимо присутствие в воздухе повышенного содержания углекислого газа. Бактериологическое исследование длится от 20 до 30 дней.

Выделенные культуры идентифицируются на основании морфологических и культуральных признаков, в реакции агглютинации и фаголизиса.

Иммунологическая диагностика бруцеллеза у человека является ведущей, поскольку бактериологические исследования практически не применяются.

Широкое распространение получили серологические реакции агглютинации, связывания комплемента, непрямой гемагглютинации, опсонофагоцитарная проба, аллергическая проба и, за последнее время, иммунофлуоресцентный анализ.

Реакция агглютинации бруцелл сывороткой больного или переболевшего (и привитого) осуществляется в пробирочном варианте (реакция Райта) и в ускоренном, за 8 минут, на оконном стекле (реакция Хеддльсона).

Первая производится в лабораторных условиях, вторая, как правило, — при массовых полевых обследованиях и не исключает в последующем постановки реакции Райта.
Для обеих реакций применяется стандартный единый бруцеллезный диагностикум.

При постановке реакции Райта положительные результаты учитываются при титре 1:200 и выше, при постановке реакции Хеддльсона положительной считают агглютинацию во второй или третьей дозе (0,02— 0,01 мл сыворотки); агглютинация на 4 креста во всех дозах сыворотки (от 0,04 до 0,01 мл) — результат резко положительный.

Разведения сыворотки в реакции Хеддльсона не сопоставляют с титрами реакции Райта, первая играет в основном роль качественной реакции, о высоте титров агглютининов судят по результатам пробирочной реакции.

Наиболее высокие титры реакции агглютинации наблюдаются обычно через 1—2 месяца от начала заболевания (у 80% обследованных больных), затем они начинают падать. Реакция Райта может сохраняться положительной в течение 3—7 лет после перенесенного заболевания, если данное лицо продолжает находиться в условиях возможной реинфекции. В случае отрицательного или сомнительного результатов реакцию следует повторить через 7—10 дней.

Реакция связывания комплемента при бруцеллезе специфична и более чувствительна, чем реакция агглютинации. Она широко применяется ветеринарными специалистами при обследовании сельскохозяйственных животных. Для повышения чувствительности РСК используют ее модификацию — связывание комплемента при 4°С в течение 18 часов. У людей эту реакцию можно применять с 20-го по 25-й день болезни.

Для выявления неполных (блокирующих) антител при бруцеллезе проводят реакцию Кумбса. На выполнение реакции требуется 18—20 часов. Неполные антитела, в отличие от агглютининов — полных антител, появляются в крови больного раньше и сохраняются дольше, что делает эту реакцию пригодной для целей ранней и ретроспективной диагностики.

За последние годы для определения агглютининов успешно используется реакция непрямой гемагглютинации. В качестве диагностикума служат эритроциты барана или человека О-группы, сенсибилизированные полисахаридным антигеном бруцелл.

Кожно-аллергическая проба при бруцеллезе становится, как правило, положительной на 3-й неделе заболевания, у привитых она нарастает значительно медленнее и достигает 72—90% к 6 месяцам после иммунизации, сохраняясь до 1 года. У больных реакция Бюрне сохраняется много лет после перенесенного бруцеллеза. На практике для текущей или ретроспективной диагностики бруцеллеза у человека или определения иммунологической эффективности прививок, следует проводить комплекс серо-аллергических исследований, которые взаимно дополняют друг друга.

Молоко больных коров, коз и овец может содержать агглютинины к бруцеллезному антигену. Для их выявления обезжиренное свежее молоко или молочная сыворотка исследуются по реакции Хеддльсона с единым бруцеллезным диагностикумом. Для этой же цели, но с цельным молоком, применяется так называемая кольцевая реакция (КР), сущность которой заключается в том, что применяют специальный окрашенный бруцеллезный антиген.

При наличии в молоке специфических агглютининов они соединяются с антигеном, образуя в верхней части пробирки (где скапливаются сливки) окрашенное кольцо, остальная часть молока остается неокрашенной. КР в настоящее время приобретает все большее значение как полевая ориентировочная серологическая проба на бруцеллез и представляет интерес как для медицинских, так и для ветеринарных работников.

В настоящее время при помощи флуоресцирующих бруцеллезных антител можно выявить бруцеллы из разнообразных субстратов — воды, крупяных продуктов, молока, брынзы, абортированных плодов, а также непрямым методом можно выявить антитела в сыворотке .крови больных, переболевших или привитых. В последнем случае положительным следует считать свечение бруцелл на 2—3 креста при разведении сыворотки 1:10—1:20. По некоторым данным, в реакции иммунофлуоресценции можно обнаружить специфические антитела в 2,5 раза чаще, чем в реакции Райта.

Опсонофагоцитарная реакция (ОФР) основана на способности сегментоядерных нейтрофилов фагоцитировать бруцеллы благодаря наличию в крови больного специфических опсонинов, нарастающих в процессе инфекции или иммунизации. Реакцию ставят с нейтрофилами крови больного или привитого со специальным антигеном (взвесь убитых бруцелл в физиологическом растворе без консерванта).

На проведение реакции уходит 1 час. Подсчитывают количество фагоцитированных бруцелл в 25 лейкоцитах. Если общее количество этих бруцелл более 25, реакцию считают ясно положительной, от 50 до 75 бруцелл — резко положительной. У здоровых людей показатель ОФР не превышает 5.

Некоторые данные свидетельствуют о высокой результативности ОФР. У больных она бывает положительной в 95,4% случаев, у переболевших—в 100%, у работников боен — в 57%, у ветработников — в 72%, у контактировавших с животными — в 5%. ОФР имеет также и прогностическое значение, показатели ее увеличиваются к периоду выздоровления или при хорошо компенсированном инфекционном процессе. ОФР при бруцеллезе воспроизводится не менее длительно, чем реакция Райта.

Широко применяется кожно-аллергическая проба с бруцеллином (реакция Бюрне), которая дает положительные результаты у больных, переболевших и привитых. Постановку и учет пробы проводят как обычно. Средний размер кожной реакции (гиперемии и инфильтрата), отмечаемой через 24 часа, — 4x6 см. Диагностическое значение имеет инфильтрат не менее 2x3 см через 24 часа.

- Читать "Профилактика бруцеллеза и противоэпидемические меры"

1. Профилактика сальмонеллеза и противоэпидемические меры
2. Бруцеллез - история, география, возбудители
3. Источник бруцеллеза и его резервуар
4. Клиника бруцеллеза у животных и человека
5. Лабораторная диагностика бруцеллеза
6. Профилактика бруцеллеза и противоэпидемические меры
7. Сибирская язва - история, география, возбудители
8. Источник сибирской язвы и ее резервуар
9. Клиника сибирской язвы у животных и человека
10. Лабораторная диагностика сибирской язвы