Основным достоинством фазово-контрастного способа микроскопирования живых неокрашенных микроорганизмов является контрастное и отчетливое изображение их. Этот метод применим в клинических лабораториях для изучения вагинальных выделений, осадков мочи, исследования простейших и их цист, процессов агглютинации, изучения ретикулоцитов и кровяных пластинок, костного мозга, злокачественных опухолей и др.

Чтобы понять сущность фазово-контрастного метода следует знать, что человеческий глаз и фотопленка воспринимают только изменения амплитуды (размахи колебаний) световой волны, но не воспринимают изменения ее фазы (задержки или ускорения).

Наблюдаемые в микроскопе препараты в тех частях, где имеются «амплитудные» смещения световых волн, являются контрастными, а в тех частях, где имеются «фазовые» смещения,— малоконтрастными.

Посредством фазово-контрастного приспособления микроскопа имеющиеся фазовые неконтрастные колебания искусственно превращаются в колебания с иной амплитудой, вследствие чего фазовые элементы препарата делаются столь же контрастными, как и амплитудные, от чего изображение всего исследуемого объекта становится контрастным и отчетливым.

Можно пользоваться обычным микроскопом МБИ-2 и специальным набором к нему фазово-контрастных приспособлений, состоящим из конденсора с комплектом кольцевых диафрагм, комплекта фазовых объективов (10Х, 20 X, 40 X и 90Х), вспомогательного микроскопа малого увеличения, который вставляется вместо окуляра, светофильтров, осветителя.

Заменяют обычный конденсор микроскопа фазовым. При этом следует проверить, чтобы фазовый конденсор правильно вошел в конденсородержатель и при подъеме конденсора его фронтальная линза выходила вровень с предметным столиком. Объективы микроскопа также заменяют на фазовые.

Прежде всего необходимо правильно установить освещение объекта. Для этого устанавливают осветительную лампу на расстоянии 15—20 см от микроскопа, сужают диафрагму осветителя и направляют лучи на плоское зеркало так, чтобы отчетливое изображение накаленной нити лампочки оказалось в центре зеркала. Двигая зеркалом, отбрасывают свет на диафрагму конденсора, которую затем полностью открывают.

При малом увеличении устанавливают препарат для изучения. Подымая или опуская конденсор, получают наиболее резкое изображение препарата при закрытой диафрагме осветителя. Если поле зрения все же оказывается чрезмерно освещенным, ставят дополнительный светофильтр. Легкими движениями зеркала перемещают ярко освещенное пятно в центр поля зрения. Затем открывают диафрагму осветителя так, чтобы все поле зрения было равномерно и полностью залито светом. Этим заканчивается установка света. Вместо окуляра вставляется вспомогательный микроскоп. Устанавливают тот фазовый объектив, которым будут пользоваться, и соответствующую ему кольцевую диафрагму конденсора.

Передвигая окулярную часть вспомогательного микроскопа, рассматривают изображение кольцевой щели диафрагмы конденсора (светлое кольцо) и изображение фазовой пластинки в объективе (темное кольцо), чтобы выяснить насколько совмещены оба эти изображения. Для получения фазового контраста необходимо возможно полнее совместить изображения этих двух колец. Это выполняется посредством центрировочных винтов фазового конденсора, которыми передвигают кольцевую щель конденсорной диафрагмы настолько, чтобы ее изображение совместилось с изображением фазовой темной пластинки. Вспомогательный микроскоп вынимают из тубуса и вставляют вместо него рабочий окуляр, после чего рассматривают изучаемый объект.

Отмечаем основные условия успешной подготовки фазово-контрастного исследования.
1. Правильная установка света.
2. Полностью открыта диафрагма фазового конденсора.
3. Соответствие номера кольцевой диафрагмы фазового конденсора увеличению фазового объектива.
4. Тщательное совмещение светлого изображения кольцевой диафрагмы и темного изображения фазовой пластинки при помощи вспомогательного микроскопа.

- Читать далее "Подготовка материала для электронной микроскопии. Подготовка материала к окраске"