Окраска по Романовскому-Гимза. Окраска спор
Приготовленный препарат фиксируют в химически чистом метиловом спирте или в смеси Никифорова 3—5 минут, вынимают, просушивают на воздухе. На высушенный препарат наливают на 20—30 минут краску Романовского-Гимза, разведенную из расчета 1,5—2 капли на 1 мл (3 капли на 2 мл) дистиллированной воды, затем препарат промывают водой и высушивают на воздухе.
С целью экономии спирта и эфира, которые расходуются при фиксировании смесью Никифорова, можно пользоваться следующим составом для фиксирования препаратов, дающим хорошие результаты
В колбу всыпают 5 г сернокислого цинка и 5 г химически чистого хлористого натрия, затем наливают 100 мл дистиллированной воды Раствор хорошо смешивают и фильтруют. Препараты кладут в профильтрованный раствор на 1—2 минуты, затем, не высушивая, покрывают краской Романовского-Гимза на 30—40 минут.
Продажную краску Романовского-Гимза можно легко приготовить Для этого в две бутылки с плотными пробками наливают по одному литру свежепрокипяченной дистиллированной воды, в одну из них всыпают 1 г азура, в другую — 1 г эозина Оба эти раствора сохраняются отдельно и не портятся от времени.
Для окрашивания препарата наливают в чистый цилиндр дистиллированной воды из расчета по 2—3 мл на каждый препарат, добавляют приготовленного раствора эозина по 4 капли на каждый миллилитр воды и столько же раствора азура, хорошо размешивают и полученный раствор наливают на препарат и оставляют на 30—35 минут Этот раствор красок быстро теряет свои свойства, поэтому его надо готовить по мере необходимости.
![окраска спор](Pic/7.jpg)
Вода для приготовления раствора должна быть нейтральной либо слабощелочной реакции Хорошо приготовленный раствор в тонком слое (налитый на предметное стекло) должен быть синего цвета с фиолетовым оттенком
При приготовлении раствора приходится приспосабливаться иногда надо брать больше эозина и меньше азура и наоборот Контролировать качество раствора можно с помощью микроскопа
Протоплазма окрашивается в голубой, ядра клетки, слизь и капсулы — в красно фиолетовый цвет.
Окраска спор
Вследствие непроницаемости оболочки споры не воспринимают окрашивания. Однако при воздействии соляной кислоты оболочка теряет устойчивость, и поэтому краска проникает в споры.
Окраска по способу Ожешко. Приготовленный на краю предметного стекла препарат просушивают и, не фиксируя, погружают для протравы на 2—3 минуты в чашку с 1 % кипящей соляной кислотой. После этого мазок промывают водой, обсушивают, фиксируют на пламени и красят карболовым фуксином через фильтровальную бумажку с подогреванием.
Остывший освобожденный от бумажки препарат обесцвечивают 5% серной кислотой, смывают водой и докрашивают дополнительной метиленовой синькой в течение 3—5 минут, затем смывают водой и высушивают.
Споры принимают ярко-красный цвет фуксина. Вегетативное тело бактерии, обесцвеченной серной кислотой, окрашивается дополнительной краской в синий цвет.
Окраска по способу Пешкова. М. А. Пешков предложил окрашивать споры синькой Леффлера, причем для изменения устойчивости оболочки он применяет кипячение. Окрашивание спор по этому способу производится так:
1. Приготовленный мазок фиксируют на пламени.
2. На фиксированный мазок наливают метиленовую синьку Леффлера и кипятят на пламени спиртовой горелки 15—20 секунд.
3. Остывший препарат смывают водой и докрашивают 0,5% водным раствором нейтралрот в течение 30 секунд.
4. Опять смывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
Споры окрашиваются в голубой либо в синий цвет. Протоплазма вегетативного тела бактерии — розовая.
Окраска капсул. Каплю воды, опущенную на предметное стекло, смешивают с каплей черной туши и в полученную жидкость вносят петлей немного агаровой либо бульонной культуры. Ребром шлифованного стекла размазывают жидкость вдоль стекла и фиксируют на пламени или в концентрированном растворе сулемы 1 минуту. Промывают водой, окрашивают карболфуксином или метиленовой синькой 5—10 минут, затем смывают водой, высушивают на воздухе и препарат исследуют в микроскоп. Вокруг окрашенного тела бактерий выделяются резко очерченные тушью капсулы.
- Читать далее "Приготовление питательных сред. Требования к питательным средам"
Оглавление темы "Микроскопия и подготовка препаратов к микроскопии":1. Микроскопическое исследование. Подготовка материала для микроскопического исследования
2. Темнопольная микроскопия. Техника темнопольной микроскопии
3. Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии
4. Подготовка материала для электронной микроскопии. Подготовка материала к окраске
5. Методы окраски препаратов. Окраска по методу Синева и метиленовым синим
6. Окраска кислотоустойчивых микробов. Окраска микробов по Граму
7. Окраска по Романовскому-Гимза. Окраска спор
8. Приготовление питательных сред. Требования к питательным средам
9. Взятие малых количеств крови. Как брать кровь из пальца для исследований?
10. Приготовление мазков крови. Взятие крови для определения СОЭ