Микробиологическая диагностика моракселлы (Moraxella (Branhamella) catarrhalis)

Патологическим материалом, в котором могут быть обнаружены моракселлы, обычно является отделяемое воспаленных слизистых оболочек дыхательных путей, их придаточных полостей, легких, среднего уха, изредка — глаза. Это может быть мокрота, трахеальный аспират, промывные воды бронхов, и синусов, слизь из зева и носоглотки, отделяемое среднего уха, конъюнктивы глаза, перитонеальный экссудат и т. п.. В редчайших случаях М. catarrhalis высевается из крови при подозрении на бактериемию и из спинномозговой жидкости (СМЖ) при гнойном менингите.

В случаях, когда материалом является СМЖ, гнойная мокрота, гнойное отделяемое среднего уха, имеет смысл провести микроскопическое исследование. Для этого готовят препараты-мазки, окрашенные метиленовым синим и по Граму в модификации Калины. В мазках могут быть видны грамотрицательные диплококки, иногда находящиеся внутри полинуклеарных фагоцитов. Но основным методом является бактериологическое исследование.

Первый день. Вышеперечисленные варианты проб материала, за исключением крови и СМЖ, независимо от вида подозреваемого возбудителя, засевают в чашки Петри с 5%-ным кровяным агаром. Кровь засевают на среду для гемокультур, а СМЖ на среды для возбудителей гнойных менингитов — «шоколадно»-кровяной и сывороточный агары.

При повторных исследованиях материала, ранее содержавшего М. catarrhalis, для слежения за элиминацией микроорганизма можно делать посев на питательный агар, содержащий нормальную сыворотку и 5 мкг/мл линкомицина (раздел 5.6), ингибирующего рост грамположительной флоры.

Второй день. После инкубации в течение 24 часов изучают выросшие колонии. Колонии М. catarrhalis на кровяном агаре отличаются от других возможных патогенов респираторного тракта. Они хорошо развиты (не менее 1 мм в диаметре), не пигментированы, влажны, имеют ровные края и гладкую поверхность, слегка выпуклые, серовато-белого цвета, не изменяют цвет кровяного агара. На сывороточном агаре колонии матовые, бесцветные, влажные. Наличие антибиотика в среде не влияет на вид колоний, но слегка замедляет их развитие.

Из части подозрительной на моракселлу колонии делают мазок, окрашенный по Граму (лучше в модификации Г. П. Калины). В случае обнаружения грамотрицательных кокков, склонных к образованию пар, колонию отсевают для получения чистой культуры на питательный агар (без биодобавок) и инкубируют в термостате 1 сутки.

Третий день. Изучают морфологию выделенной чистой культуры. Снова проверяют на наличие желтого или желто-зеленого пигмента. Ставят пробы на оксидазу и каталазу. Грамотрицательные кокки, не образующие пигмента, оксидазо- и каталазоположительные, могут относиться к родам как Neisseria (вплоть до гонококка и менингококка), так и к Moraxella (Branhamella). Подозрение на гонококк и менингококк должно отпасть, т. к. последние неспособны развиваться на средах без биодобавок — сыворотки или крови. Однако необходимость дифференциации с непигментированными нейссериями (N. sicca, некоторые штаммы N. mucosa) остается.

Кроме того, теоретически существует необходимость дифференциации М. catarrhalis и сходных представителей других видов моракселл. Из числа последних могут встретиться М. lacunata — нормальный обитатель конъюнктивы глаза и М. nonliquefaciens, входящая в нормальную флору носа. Обе моракселлы отпадают уже на 2-й день исследования на основании морфологии колоний. У М. lacunata колонии как бы «въедаются» в агар, образуя в нем лакуны. В мазках из таких колоний видны грамотрицательные коккобактерии, располагающиеся парами и небольшими цепочками. М. nonliquefacaens образует «въевшиеся» в агар колонии или крупные (2-3 мм), слизистые, хотя клетки ее морфологически похожи на М. catarrhalis.

На простых питательных средах обе моракселлы не растут, что облегчает их дифференциацию с неприхотливой М. catarrhalis. Для дифференциации от прочих грамотрицательных кокков рекомендуют тесты, которые можно условно разделить на основные и вспомогательные.

Основные тесты:
• разложение ДНК, характерное только для М. catarrhalis (не считая Staphylococcus aureus, Corynebacterium diphtheriae, и др., отличающиеся по другим признакам);
• неспособность М. catarrhalis разлагать углеводы — глюкозу, мальтозу, сахарозу, фруктозу, лактозу (в отличие от многих, в т.ч. беспигментных нейссерий, разлагающих от 1 до 4 из этих субстратов).

Вспомогательные тесты:
• неспособность к пигментообразованию;
• способность к росту при 22°С (в отличие от патогенных и некоторых пигментных видов нейссерии);
• редукция нитратов с образованием газообразных продуктов, присущая только М. catarrhalis и N. mucosa);
• неспособность к росту на кровяном агаре в анаэробных условиях (в отличие от большинства нейссерий);
• способность к разложению трибутирина до кислых продуктов, отсутствующая у нейссерий, но встречающаяся у других видов моракселл;
• неспособность к формированию полисахарида на среде с 5% сахарозы, в отличие от многих нейссерий.

Из этих проб на 3-й день имеет смысл поставить самые простые: — отсев на среды с углеводами Хью-Лейфсона и на питательный агар для культивирования при 22°С. Кроме того, выделенная культура пересевается на скошенный агар для культивирования при 35-36°С в качестве контроля роста при 22°С, а также для дальнейшего изучения.

Четвертый день. Учитывают наличие или отсутствие изменения сред с углеводами, результаты инкубации при 22°С (в сравнении с инкубацией в термостате). Еще раз убеждаются в отсутствии пигмента у выросшей культуры. В случае отсутствия пигмента, разложения углеводов и хорошо выраженного роста при 22°С можно отнести выделенную культуру к М. catarrhalis.

Однако в случае сомнения (например, при отсутствии разложения углеводов и роста при 22°С или нечеткого пигментообразования) можно поставить и другие пробы. Как уже указывалось, нейссерии являются слабыми кислотообразователями; продуцируемые ими кислоты могут быть нейтрализованы щелочными продуктами, параллельно образующимися при разложении аминокислот питательной основы. В таких случаях нейссерия может имитировать М. catairhalis. Поэтому при сомнении имеет смысл поставить тест на ДНК-азу, специфичный только для М. catarrhalis, и на редукцию нитрата, не встречающуюся у нейссерий, кроме N. mucosa.

При сомнениях по поводу пигментообразования культуру отсевают на желточно-сывороточный агар или делают 2-3 пассажа на сывороточном агаре. В зависимости от обстоятельств (оснащенность лаборатории, наличие необходимых дифференциально-диагностических сред и т. д.) можно поставить и другие вспомогательные тесты, в т.ч. пробу с трибутирином.

Перспективным является обнаружение М. catarrhalis методами генодиагностики (ПЦР) прямо в исходном материале, не дожидаясь выделения чистой культуры.

Однако выделение чистой культуры моракселлы необходимо прежде всего для выявления спектра чувствительности микроорганизма к антибактериальным препаратам.

а) Определение чувствительности к антибиотикам. Чувствительность моракселл определяют на среде АГВ или агаре Мюллера-Хинтона диско-диффузионным методом.

б) Заключение об этиологической значимости выделенного штамма моракселлы. Выявление М. catarrhalis в патологическом материале еще не указывает на ее этиологическую роль в воспалительном процессе, если учесть, что этот микроорганизм встречается в составе нормальной флоры, причем у детей — достаточно часто. К сожалению, четкие количественные параметры для дифференциации М. catarrhalis, как возбудителя воспалительного процесса или как случайного контаминанта, не разработаны. Однако для решения этого вопроса применимы подходы, используемые при выделении из патологического материала других микроорганизмов, являющихся представителями нормальной флоры человека — коагулазоотрицательных стафилококков, недифтерийных коринебактерий, оральных стрептококков, нейссерий-комменсалов и др..

В случае выделения М. catarrhalis следует помнить, что нельзя исключить ее патогенетическую роль в бактериальных ассоциациях, когда в посевах преобладают 2-3 вида, включая моракселлу.

В пользу этиологической роли моракселлы говорит ее исчезновение при многократных исследованиях в динамике процессе лечения соответствующим антибактериальным препаратом.

Микробиологические показатели этиологической значимости моракселлы учитывают в сочетании с клиническими данными и преморбидным фоном больного.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.4.2020

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.