Микробиологическая диагностика нейссерий

Материал, в котором могут оказаться нейссерии, многообразен. Это отделяемое при местных воспалительных процессах, а также слизь из зева при тонзиллите, экссудат при синуситах, отитах, конъюнктивитах, мокрота, отделяемое шейки матки при цервиците и т.д. При септических заболеваниях это кровь, СМЖ, экссудаты серозных полостей.

Первый день. Материал из воспалительных очагов не микроскопируют (за исключением мокроты), а засевают в чашки Петри на 5 %-ный кровяной агар — универсальную среду для первичного выделения возбудителей гнойносептических заболеваний.

Из мокроты готовят мазки (обычно — растирая образец между двумя предметными стеклами), фиксируют на пламени и окрашивают по Граму. При микроскопии обращают внимание на преобладающие формы микроорганизмов и их взаимоотношения с клеточными элементами. Описаны случаи нахождения клеток N. mucosa внутри поглотивших их нейтрофилов.

При подозрении на гнойно-септическое заболевание исследуемым материалом является кровь, которую немедленно после взятия засевают на среды для гемокультур.

При подозрении на гнойный менингит СМЖ вначале микроскопируют (окраска метиленовой синью), а затем засевают в чашки Петри на «шоколадно»-кровяной, сывороточный и обычный питательный агары (для того, чтобы уловить все возможные возбудители менингита).

Если имеется необходимость выделения именно нейссерий-комменсалов, то материал засевают в чашки с сывороточным агаром, содержащим антибактериальные препараты (например, линкомицин, см. раздел 5.6.) с целью подавления сопутствующей грамположительной флоры.

Второй день. Отбирают хорошо развитые, круглые, опалесцирующие или пигментированные (желтые — N. flavescens, зеленоватые, иногда суховатые — N. subflava) колонии диаметром 1,0-1,5 мм. N. mucosa формирует слизистые, трудно снимаемые колонии; у N. sicca колонии сухие, крошащиеся. Отобранные колонии отсевают на скошенный сывороточный агар.

Третий день. Из выросших культур готовят мазки, окрашенные по Граму (желательно — в модификации Калины) и микроскопируют их. В случае обнаружения грамотрицательных кокков, нередко парно расположенных, можно заподозрить принадлежность культуры к роду нейссерий или моракселл. Ставят реакции на оксидазу и каталазу. Снова просматривают посевы (в том числе вчерашние колонии) на предмет пигментообразования.

Пигментированные культуры, обладающие оксидазой и каталазой, можно предположительно отнести к роду нейссерий. Бесцветные (или медленно образующие пигмент) необходимо дифференцировать с моракселлой; подозрительные на нейссерии надо идентифицировать на видовую принадлежность.

Для этих целей проводят ряд проб и отсевов на дифференциально-диагностические среды:
а) ставят пробу на редукцию нитратов;
б) пересевают на среды Хью-Лейфсона для выявления способности к разложению глюкозы, мальтозы, сахарозы, фруктозы, лактозы;
в) делают отсев на питательный сывороточный агар и помещают в термостат при 22°С (можно оставить в комнате, если температура в ней равна 22°С);
г) сомнительную в плане пигментообразования культуру отсевают на желточносывороточный агар. В случае невозможности приготовления этой среды культуру еще раз пересевают на сывороточный агар с 1-2 последующими пассажами;
д) делают отсев на скошенный сывороточный агар для инкубации при 37°С, как контроль теста на способность расти при 22°С, а также для получения свежей суточной культуры с целью дальнейшего изучения.
е) ставят пробы на чувствительность к антибиотикам.

Четвертый день. Учитывают результаты посевов на дифференциально-диагностические среды, снова просматривают рост на предмет пигментообразования и, руководствуясь данными таблицы ниже, относят микроорганизм к тому или иному виду. Учитывают результаты определения чувствительности.

При сомнительных результатах, выпадении ряда тестов, отсутствии пигментообразования, можно поставить дополнительные пробы, в основном для отличия от морфологически и культурально сходной с нейссериями, но никогда не образующей пигмента Moraxella catarrhalis:
• посев на агар с 5% сахарозы;
• посев на агар с препаратом ДНК для выявления ДНК-азы;
• посев на среду с трибутирином для выявления трибутириназы.

Пятый-шестой дни. Определяют наличие ДНК-азы, устанавливают:
• способность образовывать полисахарид из сахарозы и разлагать трибутирин (оба свойства учитывают через 48 часов, т.е. на 5-й день), если эти пробы были поставлены;
• определяют чувствительность к антибиотикам;
• выдают окончательный ответ о видовой принадлежности выделенной культуры нейссерии и ее чувствительности.

Определение чувствительности нейссерий к антибиотикам

Чувствительность нейссерий определяют диско-диффузионным методом на бессывороточных средах (среда АГВ, агар Мюллера-Хинтона).

Отождествление выделенной нейссерии с возможным причинным агентом заболевания

Делается на основании клинических данных в совокупности с анамнезом и с учетом критериев этиологической значимости бактерий-комменсалов, возбудителей оппортунистических инфекций.

К сожалению, количественные параметры до сих пор не определены для многих возбудителей, являющихся одновременно представителями нормальной флоры человека — в том числе нейссерий, коагулазо-негативных стафилококков, оральных стрептококков, недифтерийных коринебактерий и т. д. В этих случаях рекомендовано применять следующие критерии:

• при обнаружении чистой культуры в материале, который в норме не содержит бактерий (кровь, СМЖ, синовиальная и плевральная жидкость и т.д.) найденный микроорганизм может считаться этиологическим агентом воспалительного процесса;

• при исследовании материала из открытых полостей, заведомо содержащего разнообразные микроорганизмы, возбудителем с большой долей вероятности может считаться бактерия, доминирующая в посевах (и в мазках);

• в пользу этиологической роли комменсала говорит выделение его при многократных исследованиях в динамике и его элиминация при лечении соответствующим антибактериальным препаратом.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 31.3.2020

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.