а) Таксономия. Грамотрицательные палочки, объединенные в род Citrobacter, описывались в литературе под разными названиями: Salmonella ballemp, Escherichia freundii, группа Bethesda, группа Ballemp, г руппа Bethesda Ballemp. По решению Международного номенклатурного подкомитета по Enterobacteriaceae, перечисленные бактерии объединены в самостоятельный род Citrobacter, получивший свое наименование по предложению С. Н. Werkman и G. F. Gillen в 1932 г. благодаря способности утилизировать цитрат и использовать его в качестве единственного источника углерода.

Видовая классификация этого рода также неоднократно пересматривалась. Р. R. Edwards и W. Н. Ewing (1986) рассматривают только три вида С. freundii, С. diversus, С. amalonaticus. С. Werkman и G. Gillen выделили 7 видов: С. decolorans, С. album, С. freundii, С. diversus, С. amalonaticus, С. intermedius, С. glycologenes. В настоящее временя род включает 11 таксонов: 9 видов (С. amalonaticus, С. braakii, C.farmen, С. freundii, С. koseri, С. rodentium, С. sedlakii, С. werkmanii, С. youngae) и два ДНК-геновида -10-й и 11-й).

б) Морфология. Все представители рода Citrobacter — грамотрицательные палочки, подвижные за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Спор и капсул не образуют, факультативные анаэробы, хорошо растут на простых питательных средах, образуя колонии 2-4 мм в диаметре, ферментируют глюкозу, (образуя кислоту и газ), маннит, сорбит, арабинозу, рамнозу, мальтозу, ксилозу, трегалозу, утилизируют цитрат в качестве единственного источника углерода, восстанавливают нитраты до нитритов, не обладают фенилаланиндезаминазой и лизиндекарбоксилазой, не ферментируют инозит, на среде с глюкозой не образуют ацетилметилкарбинола, дают положительную реакцию с метиловым красным. Внутривидовую дифференциацию осуществляют по признакам, приведенным в таблице ниже.

Цитробактеры встречаются в кишечнике здоровых людей и животных, их обнаруживают в почве, воде, в продуктах питания. Бактериологам наиболее известны виды C.freundii, С. diversus и С. amalonaticus. С. diversus и С. koseri — термины-синонимы.

Юридическая комиссия международного комитета по систематике бактерий в 1993 году опубликовала мнение о необходимости сохранения названия С. koseri вместо С. diversus, хотя в литературе чаще используют первое название (С. koseri).

Бактерии рода Citrobacter вызывают 1-2 % внутрибольничных инфекций мочевого тракта и ран. Сепсис, вызванный С. koseri, в 50 % случаев заканчивается летально. У новорожденных описаны случаи менингита, также обусловленные С. koseri и C.freundii.

в) Факторы патогенности. Как и все грамотрицательные бактерии, цитробактеры обладают эндотоксином (ЛПС) и поверхностными факторами адгезии. Плотное прикрепление C.freundii к клеткам НЕр-2 показано на рисунке ниже. Некоторые штаммы С. freundii могут синтезировать V1-антиген. Штаммы С. freundii, С. koseri и С. amalonaticus, выделенные от больных, особенно во время пребывания в госпитале, способны синтезировать различного типа пили и энтеротоксины, многообразные протеолитические ферменты, ДНК-азы, РНК-азы и пр..

Лабораторная диагностика. Выделение представителей рода Citrobacter из патологического материала и идентификация предполагаемого возбудителя осуществляется стандартным способом.

Первый день. Посев исследуемого материала на среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар. При этом следует помнить, что посев материала, не относящегося к жидкостям организма, которые в норме стерильны, следует проводить количественным методом, позволяющим судить об уровне содержания предполагаемого возбудителя. С этой целью гомогенизируют определенную навеску материала и готовят 10-кратные разведения. Для посева, как правило, используют три нечетных разведения: 10³, 10⁵, 10⁷. Засеянные чашки Петри инкубируют в термостате при 37°С в течение 18-24 ч.

Второй день. Просматривают чашки, засеянные накануне, подсчитывают число колоний каждого вида, отбирают подозрительные колонии для дальнейшего изучения. На среде Эндо бактерии рода Citrobacter образуют красные или розовые колонии, похожие на колонии эшерихий. Колонии лактозоотрицательных вариантов бесцветны или сероватого цвета с розовым оттенком и более темным центром. На среде Плоскирева вырастают розово-красные колонии с темным центром или окрашенные в тон среды. У штаммов, интенсивно продуцирующих сероводород, центр колонии черного цвета. На висмут-сульфит агаре рост более обильный, чем у сальмонелл, колонии светло-зеленые, коричневые или черные.

Окраска среды под колониями не изменяется, в отличие от сальмонелл. Отобранные колонии (не менее 3 при однородном по виду характере роста или 2-3 колонии каждого вида) засевают последовательно в ряд пробирок, не прожигая петли при пересеве из одной пробирки в другую: с полужидким (0,2-0,3%) агаром, со средой Клиглера, средой Кларка и цитратным агаром Симмонса. Под пробку пробирки с полужидким агаром помещают полоску индикаторной бумаги на индол. Посевы инкубируют в термостате при 37°С в течение 18-24ч.

Третий день. Учитывают результаты ферментативной активности. Культуры, ферментирующие глюкозу, ферментирующие или не ферментирующие лактозу, утилизирующие цитрат (рост на среде Симмонса), образующие или не образующие сероводород и индол, дающие положительную реакцию с метиловым красным, не образующие ацетилметилкарбинола (отрицательная реакция Фогеса-Проскауэра), подозрительны на принадлежность их к роду Citrobacter. Для подтверждения родовой принадлежности и определения вида делают посев на фенилаланиновый агар, среды с аминокислотами (лизином и орнитином), среду с малонатом натрия, среды Гисса с сахарозой, дульцитом, адонитом, мелибиозой, а также на скошенный агар для последующего серологического типирования (в случае обнаружения С. freundii).

Четвертый день. Учет результатов на средах, засеянных накануне. При выделении С. freundii проводят серологическое типирование по О- и Н-антигенам с диагностическими сыворотками в реакции агглютинации на стекле, сначала с поливалентными, а затем типовыми и факторными О-сыворотками. После определения

О-антигена приступают к типированию с Н-сыворотками и установлению Н-антигена. В Российской Федерации осуществлялся производственный выпуск диагностических агглютинирующих О-сывороток для типирования штаммов С. freundii. Диагностические препараты для серологического типирования других видов рода Citrobacter отсутствуют.

г) Лекарственная чувствительность. Цитробактеры обычно чувствительны к каннамицину и гентамицину, устойчивы ко многим антибактериальным препаратам, в частности, к карбенициллину, ампициллину, цефалотину. Приобретенная резистентность формируется в процессе лечения и зависит от тактики выбора и назначения препаратов. Полиантибиотикоустойчивые штаммы цитробактеров нередко являются причиной опортунистических инфекций у иммунокомпрометированных больных. Чувствительность к антибиотикам определяют общепринятыми методами, чаще используют дискодиффузионный метод на среде АГВ или агаре Мюллера-Хинтона.

- Читать далее "Род условно-патогенных эдвардсиелл (Edwardsiella): морфология, культуральные, биохимические свойства"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 6.4.2020