Доставляемый в лабораторию материал подвергают бактериологическому исследованию в тот же день. Техника посева зависит от характера высеваемого материала, консистенции питательной среды и цели исследования.

Для проведения посевов необходимы: подлежащий исследованию материал, питательные среды, бактериологическая петля, шпатели (стеклянные, металлические), пастеровские и градуированные пипетки, металлические кюветы или поднос для переноса засеянных чашек, металлические коробки для переноса пробирок, ведро или бачок с крышками для сброса отработанного инфицированного материала, спиртовая или газовая горелка.

Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку — «зеркало». Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в большом или точно отмеряемом объеме.

Способ взятия плотного материала определяется консистенцией последнего. При посевах чаще всего пользуются бактериологической петлей.

Все манипуляции, связанные с посевом и выделением микробных культур, производят вблизи пламени горелки. Бактериологическую петлю перед взятием материала прокаливают в пламени горелки, затем ее остужают, чтобы при соприкосновении с жидкой средой она не вызывала кипения, а прикосновение к агару не сопровождалось его плавлением.

Для остуживания петлю лучше всего погружать в конденсационную жидкость пробирки со стерильной питательной средой или прикасаться ею к крышке чашки Петри со стерильной средой. Нельзя остужать петлю прикосновением к поверхности питательной среды, даже свободной от микробного материала, так как на ней могут находиться колонии, не видимые простым глазом.

После окончания посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящейся в ней микробной культуры или инфицированного микроорганизмами материала.

Пипетки и шпатели, использованные для посевов, опускают в дезинфицирующий раствор.

По завершении посева на дне чашек Петри или на верхней части пробирок пишут название засеянного материала либо номер анализа и дату посева.

Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды:

• При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый в пастеровскую или градуированную пипетку, вливают в питательную среду.

• При посеве на скошенный питательный агар из пробирки в пробирку обе пробирки (одну — с посевным материалом, другую — со стерильной средой) берут в левую руку между I и II пальцами так, чтобы их края были на одном уровне. Правой рукой вынимают пробки из пробирок и зажимают их между IV, V пальцами и ладонью. Свободными тремя пальцами правой руки берут бактериологическую петлю и держат как писчее перо. Вынув пробки, края пробирок обжигают в пламени горелки. Прокаленную петлю вводят через пламя горелки в пробирку с посевным материалом, охлаждают и небольшое количество посевного материала переносят в пробирку со скошенным агаром, нанося штрихи снизу вверх от одной стенки до другой.
После посева пробирки закрывают пробками, предварительно проведя края пробирок и пробки через пламя горелки. Петлю прокаливают.

• При посеве на поверхность плотной питательной среды из пробирки в чашки Петри II, III и V пальцами левой руки фиксируют пробирку, а I и IV пальцами той же руки приоткрывают крышку чашки Петри настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель.

Небольшое количество исследуемого материала, взятого из пробирки бактериологической петлей, втирают в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериологическую петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхность, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки (при условии, что среда прозрачна) на 4, 8 или 16 равных частей.

Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность получить изолированные колонии микробов в концевой ее части.

Для равномерного распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды вместо петли пользуются тампоном или шпателем.

При посеве шпателем материал наносят на поверхность среды петлей или пипеткой, а затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно растирают его по всей поверхности агара. При этом левой рукой придерживают слегка приоткрытую крышку и одновременно вращают чашку. После посева металлический шпатель прокаливают в пламени горелки, а стеклянный помещают в дезинфицирующий раствор.

При посеве тампоном последний с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.

При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного или газонного. Посев газоном производят, когда нужно получить большое количество микробной культуры одного вида.

Для посева материала в толщу плотной питательной среды готовят взвесь в стерильной водопроводной воде или в изотоническом растворе. Набирают 0,1-1 мл взвеси в пипетку (в зависимости от степени предполагаемого микробного загрязнения) и выпускают в пустую стерильную чашку Петри. Вслед за этим в чашку заливают 15-20 мл мясопептонного агара, расплавленного и остуженного до температуры 40-45°С (при такой температуре пробирка со средой, приложенная к щеке, не вызывает ощущения ожога). Для равномерного распределения исследуемого материала в питательной среде закрытую чашку с содержимым слегка вращают на поверхности стола.

Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку как обычно, и в центр столбика до дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.

- Читать далее "Методы выделения чистых культур микроорганизмов по Дригальскому, Коху"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 20.05.2019