Чистой называют культуру, содержащую микроорганизмы одного вида и полученную как потомство одной клетки.

Культуры бактерий одного вида, выделенные из различных источников или из одного источника в разное время, называют штаммами. Разные штаммы одного и того же вида бактерий могут отличаться друг от друга по ряду свойств, например по чувствительности к антибиотикам, способности к образованию токсинов, ферментов и др.

Чистые культуры можно получить из исходной микробной клетки, изолированной при помощи микроманипулятора, или из изолированных колоний путем их пересева в отдельные пробирки с питательной средой.

При получении чистой культуры из изолированных колоний предпочтительно производить высев исследуемого материала на неселективные среды, поскольку в случае использования селективных сред в колонии или рядом с ней могут присутствовать жизнеспособные, но не растущие на этих средах сопутствующие микроорганизмы, которые будут пересеяны вместе с выделяемым микроорганизмом. На неселективных же средах сопутствующие микроорганизмы образуют видимые колонии.

Для выделения чистой культуры по способу Дригальского расплавленную питательную среду разливают в 3 чашки Петри. Застывшую среду обязательно подсушивают, так как влажная поверхность способствует сливному росту. В первую чашку вносят одну каплю исследуемого материала и стерильным шпателем втирают его в поверхность питательной среды.

Далее, не набирая нового материала и не прожигая шпателя, последний переносят во вторую, а затем и в третью чашки, втирая в поверхность питательных сред оставшийся на нем материал. При посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, на второй и на третьей чашках вырастают изолированные колонии. Полученные отдельные колонии служат для пересева в пробирки с жидкой или твердой питательной средой и получения чистой культуры микроорганизма.

Метод рассева по поверхности, предложенный Дригальским, наиболее широко применяется для получения чистой культуры микробов. Вместо шпателя можно пользоваться петлей. Материал на питательной среде распределяют по всей чашке параллельными штрихами в одном направлении. Затем, повернув чашку на 90 °, проводят штрихи в направлении, перпендикулярном первым штрихам. При таком способе посева материал, находящийся в петле, расходуется постепенно, и по линиям штрихов, нанесенных в конце посева, вырастают изолированные колонии микробов.

При получении чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху) три пробирки, содержащие по 15 мл мясопептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43-45 °С. В пробирку вносят одну бактериологическую петлю исследуемого материала. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав между ладонями.

После этого одну петлю (прокаленную и остуженную) содержимого первой пробирки переносят во вторую и таким же образом из второй в третью. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок.

После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 20.05.2019