Продукты, образуемые транскриптазой in vivo, содержат одноцепочечные РНК десяти различных классов, каждая из которых может гибридизоваться с соответствующей двухцепочечной вирионной РНК, имеющей аналогичную длину (Шаткий и др., 1968; Ватанабе и др., 1968b). Выяснению природы этих транскриптов во многом помогло то, что обработанные химотрипсином сердцевины способны интенсивно синтезировать такие одноцепочечные РНК in vitro (Шаткин и Сайп, 1968b).

Транскриптаза сердцевины, которая активируется при удалении внешнего капсида, требует присутствия Mg2+ или Мп2+ и имеет максимальную активность при температуре 50 °С или выше. Фермент транскрибирует все 10 двухцепочечных РНК с постоянной скоростью, равной по крайней мере 12 нуклеотидам в секунду в течение 2 дней при 37 °С. Регуляция транскрипции in vitro отсутствует, т. е. число синтезируемых молекул РНК каждого класса обратно пропорционально их молекулярному весу; при этом родительская двухцепочечная РНК-матрица сохраняется (Скехел и Иоклик, 1969). Сходные данные были получены Левином и др. (1970), использовавшими субвирусные частицы из зараженных клеток.

Гиллис и др. (1971) опубликовали замечательные электронные микрофотографии, на которых видно до 10 молекул одноцепочечных РНК, одновременно образуемых активными сердцевинами, полученными при обработке химотрипсином. На основании этих данных можно думать, что каждый вирион содержит по крайней мере 10 молекул транскриптазы. Вероятно, транскрипты покидают сердцевину через 12 полых капсомеров, расположенных на вершинах икосаэдра (Луфтиг и др., 1972).
Звееринк и Иоклик (1970) предположили, что внутренняя часть сердцевины состоит из полимерных молекул транскриптазы, содержащих полипептиды.

Все 10 одноцепочечных транскриптов РНК имеют одинаковую полярность, о чем свидетельствует неспособность продукта к самоотжигу. Из этого факта следует, что транскрибируется лишь одна цепь двухцепочечной матрицы (Шонберг и др., 1971; Сакума и Ватанабе, 1971). Мак-Доуэл и др. (1972) строго доказали, что транскрипты — это молекулы моноцистронной мРНК- Одноцепочечньге РНК, синтезированные in vitro сердцевинами, полученными при обработке химотрипсином, транслировались в бесклеточных экстрактах из ретикулоцитов кролика с образованием всех 8 известных полипептидов, закодированных в геноме реовируса.

РНК реовирусов всех классов имеют на 5'-конце (ф)ффГ (Левин и др., 1970а) и на 3'-конце цитозин (Бэнерджи, 1971). Никэлс и др. (1972b) определили 25 нуклеотидов на 5'-конце молекул мРНК класса s и обнаружили, что последовательность девяти первых (ф)ффГЦЦАУУУУУ совпадает с последовательностью, находящейся в нетранслирующихся участках на б'-концах и в межцистронных районах некоторых РНК-фагов. Они предположили, что этот участок представляет собой либо место присоединения рибосомы, либо участок узнавания полимеразы, либо место, к которому прикрепляется компонент, связывающий фрагменты генома в единое целое.

В последовательности первых 25 нуклеотидов инициирующий кодон отсутствует, и, следовательно, он должен находиться дальше. Левин и др. (1972) представили данные о существовании инициирующего кодона АУГ в молекулах мРНК реовируса всех трех классов; было обнаружено, что Мет-тРНКф» обычный инициатор синтеза белка в прокариотических и эукариотических системах, комплексируется с мРНК реовируса на рибосомах мышиных фибробластов L-929 in vitro в участке, реагирующем с пуромицином.

Никэлс и др. (1972а) предположили, что около 3000 молекул олигонуклеотидов, обычно обнаруживаемых в вирионе, являются продуктами абортивной транскрипции. Олигонуклеотиды, имеющие на 5'-конце Г, сходны с 5'-концевой последовательностью мРНК реовируса; авторы предполагают, что за короткий период, во время которого субвирусная частица одевается во внешний капсид на последнем этапе сборки, транскриптаза начинает транскрипцию, однако завершение процесса невозможно из-за пространственных ограничений; они вычислили, что весь дополнительный набор олигонуклеотидов вириона может синтезироваться менее чем за 3 мин.

Другой основной вид олигонуклеотидов реовириона — полиаденилаты (Белами и Иоклик, 1967; Шаткин и Сайп, 1968а)—появляются в результате повторного копирования коротких полиуридиловых последовательностей, которые, как известно, располагаются возле 5'-конца мРНК реовируса (Никэлс и др., 1972а).

- Читать далее "Трансляция реовирусов. Репликация РНК реовирусов"