Клетки in vitro можно вырастить несколькими способами, перечисленными ниже. Органная культура. Правильно приготовленные срезы органов сохраняют in vitro свою структуру и функции в течение нескольких дней, а иногда и недель. Такие органные культуры (точнее, культуры ткани) дыхательного эпителия были использованы при изучении гистопатогенеза заболеваний, вызываемых респираторными вирусами, поскольку некоторые вирусы этой группы вне естественного хозяина могут расти лишь на органных культурах (см. обзор Хоорна и Тиррела, 1969).
Органная культура эмбрионального кишечного эпителия применяется для изучения некоторых кишечных вирусов.

Культура ткани. Этот термин первоначально использовали для обозначения культур суспендированных кусочков измельченной ткани или «эксплантатов» ткани, заключенных в сгусток плазмы. Затем этим термином стали называть любую культуру клеток in vitro. Термин «культура ткани» в его первоначальном смысле сейчас устарел, и его широкое использование представляется нам нецелесообразным. Поэтому при последующем изложении мы будем пользоваться термином «культура клеток».

Культура клеток. Ткань превращают в суспензию, состоящую из отдельных клеток или небольших конгломератов, механически измельчая, а затем обрабатывая ее протеолитическими ферментами. После отмывки и подсчета клеток суспензию разбавляют средой и дают возможность клеткам прикрепиться к плоской поверхности специально обработанного стеклянного или пластмассового сосуда.

Клетки большинства типов быстро прикрепляются к поверхности и при оптимальных условиях делятся примерно 1 раз в день до тех пор, пока поверхность не покроется сплошным монослоем клеток. Подробные описания методик, используемых при культивировании клеток, можно найти в специальных руководствах Пола (1972) и Шмидт (1969а).

Успехи в культивировании клеток были в значительной степени обусловлены разработкой сред с определенным химическим составом, содержащих практически все питательные вещества, необходимые для роста клеток. Наиболее известная среда такого типа, разработанная Иглом (1959), представляет собой изотонический буферный (рН 7,4) раствор неорганических солей, глюкозы, витаминов, коферментов, аминокислот, содержащий антибиотики для предотвращения роста бактерий.

К среде Игла необходимо добавлять сыворотку, которая обеспечивает клетки дополнительным фактором (факторами). Природа этих факторов пока не установлена, однако клетки многих типов без них расти не способны. Недавно начаты поиски методик, которые позволили бы культивировать клетки при более высоком, чем обычно, содержании кислорода в газовой среде; кроме того, вместо общепринятой бикарбонатной буферной системы используют нелетучие буферные растворы (Мэсси и др., 1972).

Такие буферы — фосфаты или замещенные сульфоновые кислоты (HEPES, т. е. N-2-оксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновая кислота или TES, т. е. N-трис(оксиметил)метил-2-аминометансульфоновая кислота) — лучше поддерживают определенный рН среды и тем самым уменьшают потребность в специальных термостатах с подачей С02.

- Вернуться в оглавление раздела "Вирусология"