Помимо «пустых» частиц, вообще не содержащих ДНК (Крофорд и др., 1962), препараты вируса полиомы могут содержать частицы, в которых количество ДНК меньше обычного. Если вирус полиомы или SV40 несколько раз пассировать с высокой множественностью заражения, количество инфекционных частиц заметно уменьшится, тогда как общий выход вирусных частиц упадет весьма незначительно (Учида и др., 1966; Блэкстайн и др., 1969).

Дефектные частицы более гетерогенны по плотности, чем полностью инфекционные, а их кольцевая ДНК на 10—50% короче, чем ДНК инфекционных частиц (Иошике, 1968; Торн и др., 1968). Несмотря на то что дефектные частицы иеинфекционны, они обладают некоторой биологической активностью, например могут индуцировать образование вирус-специфических антигенов в зараженных клетках и вызывать опухоли при введении чувствительным животным (Зауэр и др., 1967; Учита и Ватанабе, 1968).

Механизм, приводящий к утрате части вирусного генома, остается неизвестным, но можно предположить, что он является результатом процесса, вызывающего не только делеции вирусной ДНК, но и другие значительные изменения в ее структуре. Существование такого рода процесса подтверждается экспериментами по гибридизации и картированию гетеродуплексных областей. Так, если ДНК, выделенную из SV40, выращенного при высокой множественности заражения, исследовать методом картирования гетеродуплексов, то наряду с делециями выявляется множество инверсий и замещений (Таи и др., 1972).

Одни замещения могут отражать перестройки внутри вирусного генома, другие — рекомбинацию между вирусной и клеточной ДНК, приводящую к включению хозяйских последовательностей в вирусный геном (Лейви и Винокур, 1972). В препаратах вируса, выращенного при низкой множественности заражения, таких изменений не наблюдается. Причина этих явлений неясна, однако даже сами по себе они дают основания сомневаться в том, что природа ДНК SV40 нам окончательно понятна, и заставляют быть более разборчивыми в методах выращивания вируса.

Изучение этого явления, возможно, даст подходы к объяснению того, как два небольших вируса вызывают злокачественную трансформацию, одним из проявлений которой является интеграция вирусного генома с ДНК клетки-хозяина.

Структура аденовирусов

Этот род состоит из большого числа видов вирусов человека, обезьян, крупного рогатого скота и других млекопитающих, а также нескольких видов вирусов птиц. Все вирусы имеют характерную икосаэдрическую структуру. Они лишены наружной липопротеидной оболочки и не содержат липидов и гликопротеидов.

Капсид вируса с поперечником около 70 нм состоит из 252 капсомеров (Т = 25) примерно сферической формы. Электронно-микроскопическое изучение изолированных гексонов показало, что они представляют собой полые вытянутые эллипсоиды с внутренним диаметром 2,5 нм, наружным диаметром от 8 до 9,5 нм и длиной от 8,8 до 11,5 нм (Петтерсон и др., 1967).

Очищенный белок гексона удалось получить в кристаллическом виде. По данным рентгеноструктурного анализа, кристаллы белка гексона аденовируса типа 2 (Франклин и др., 1971) и типа 5 (Корник и др., 1971) обладают симметрией кубического типа и каждый гексон состоит из трех кристаллографических субъединиц мол. весом 110 000—120 000.

Каждый из двенадцати капсомеров на вершинах икосаэдра с окружающими его пятью соседями называется пептоном. Пентоны имеют сложную структуру; они состоят из округлой головки (основание пептона), погруженной в капсид,. и длинного выступающего стержня (нити) диаметром 2 нм. Изолированные субъединицы основания пентона, по-видимому, глобулярны (внутренний диаметр 8 нм) и с торца имеют вид пятиугольников.

Нити различных серотипов аденовирусов человека сильно варьируют по длине: измерения для одиннадцати серотипов дали величины от 10 до 31 нм (Норрби, 1969). Серотипы одной и той же подгруппы, по-видимому, имеют нити равной длины. На конце нитей имеется утолщение диаметром 4 нм. Белок нити аденовируса типа 5 удалось получить в кристаллическом виде (Мотнер и Перейра, 1971); он образует игольчатые кристаллы, тонкая структура которых разрешена на электронных микрофотографиях до 3,5 нм. Методом оптической дифракции показано, что кристаллы высоко-упорядочены.

Для достаточно мягкого разрушения вириона и выделения группы капсомеров и сердцевины в относительно неповрежденном виде применяются различные методы. Сначала можно получить пептоны, диализуя вирионы при рН 6,0—6,6 (Лэвер и др., 1969), а затем гексоны при помощи замораживания с последующим оттаиванием (Прейдж и др., 1970).

Обработка пиридином (10%) или нагревание при 56 °С в присутствий дезоксихолата или без него (Рассел и др., 1971) обычно приводят к высвобождению групп из девяти гексонов, окружающих единичный пентон на вершине частицы. При продолжительной обработке одним из этих агентов или при обработке 5 М мочевиной, формамидом, ацетоном, а также при рН 10,5 удаляются все поверхностные капсомеры, оставляя нетронутой вирусную сердцевину, содержащую ДНК и два внутренних белка, один из которых (сердцевинный белок 2) обладает необычным аминокислотным составом. Рассел и др. (1971) предложили назвать комплекс ДНК с двумя белками вирусной сердцевиной, а комплекс ДНК с белком сердцевины 2 — внутренним нуклеопротеидом.

- Читать далее "Серологические реакции аденовирусов. Белки аденовирусов"