Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Оценка системы цитокинов. Этапы комплексной оценки системы цитокинов

Оценка иммунной системы — довольно сложная задача клинической иммунологии. Она имеет свои особенности и определенные методологические подходы. Помимо оценки иммунной системы по двухуровневому и патогенетическому принципу, сформировался третий принцип, который мы обозначаем как аналитический, основанный на комплексной оценке различных иммунных подсистем, например цитокиновой, рецепторов врожденного иммунитета (TLR, NLR), комплемента и т.д.

Один из таких подходов состоит в комплексной оценке системы цитокинов — важнейшей для организма системы медиаторов межклеточных взаимодействий. Следует отметить, что в клинической медицине выявляют существенный рост заболеваний, обусловленных избыточной или недостаточной активностью цитокинов. Чтобы установить роль цитокинов в иммунопатогенезе различных заболеваний, только определения содержания цитокина в биологических жидкостях недостаточно. Цитокиновая система — крайне сложный компонент иммунной системы, включающий:

• клетки-продуценты цитокинов;
• гены и сигнальные пути, связанные с выработкой цитокинов;
• растворимые или мембранные формы цитокинов и их антагонисты;
• клетки-мишени цитокинов;
• рецепторы цитокинов, экспрессируемые клетками-мишенями;
• сигнальные пути, запускаемые через цитокиновые рецепторы, и экспрессия генов, связанных с их реализацией;
• группа растворимых рецепторов цитокинов.

Все эти этапы крайне важны для функционирования цитокиновой системы. Известны заболевания, в иммунопатогенезе которых может наблюдаться нарушение любого из названных механизмов.

В качестве примера можно рассмотреть участие некоторых цитокинов в иммунопатогенезе туберкулеза. CD4+ и CD8 Т-лимфоциты вырабатывают ИФН-у, участвующий в активации макрофагов и других клеток при инфицировании микобактериями. Однако туберкулезная инфекция протекает крайне тяжело у больных, имеющих мутантный рецептор ИФН-у. При этом уровень ИФН-у в циркуляции у больных с тяжелой формой туберкулеза может быть нормальным или повышенным, однако нарушена его рецепция (вследствие дефекта рецептора). Известно, что ФНО-а необходим для защиты против микобактерий и принимает активное участие в образовании гранулем. В последние годы для лечения некоторых аутоиммунных заболеваний, например ревматоидного артрита, стали использовать лекарственные средства на основе моноклональных антител против ФНО-а. При ревматоидном артрите уровень ФНО-а существенно превышает нормальные показатели, но под влиянием специфических антител он снижается вплоть до нормальных значений. У большинства больных наступает ремиссия заболевания. Однако в некоторых случаях с высокой частотой происходит реактивация латентной формы туберкулезной инфекции. Подобного рода примеров довольно много при самых разных заболеваниях.
Возникает крайне важная проблема клинической иммунологии: как и на каком уровне следует оценивать разные этапы, связанные с выработкой и рецепцией цитокинов?

системы цитокинов

Комплексный анализ системы цитокинов включает несколько последовательных этапов.
• Анализ на уровне клеток-продуцентов (мононуклеарные клетки, лимфоциты, лейкоциты, макрофаги, ДК и др.)

Генный уровень
- Исследование генов, которые ответственны за синтез цитокинов и их полиморфизмов, методами, основанными на ПЦР.
- Идентификация адаптерных и других молекул, которые проводят сигнал, запускающий транскрипцию цитокиновых генов (ПЦР, иммуноблоттинг и др.).

Клеточный уровень
- Выявление и определение количества клеток (ТЫ, Th2, регуля-торные Т-лимфоциты и др.), содержащих цитокины (методом внутриклеточного окрашивания цитокинов).
- Подсчет количества клеток, секретирующих анализируемые цитокины (методом ELISPOT).

• Анализ растворимых цитокинов и их антагонистов в биологических средах организма
- Количественное определение цитокинов с помощью ИФА. - Тестирование биологической активности цитокинов на различных моделях (клеточные линии, клетки-мишени и др.).
- Иммуногистохимическое окрашивание цитокинов в тканях. - Определение соотношения оппозитных цитокинов (например, про- и противовоспалительных), а также цитокинов и их антагонистов.

• Определение действия цитокинов на клетки-мишени
- Выявление экспрессии рецепторов цитокинов и их генов (проточная цитофлюориметрия, ПЦР).
- Анализ молекул, участвующих в передаче сигнала с рецепторов цитокинов в клетках-мишенях (ПЦР, иммуноблоттинг).
- Анализ фенотипа и функциональной активности клеток-мишеней после действия на них конкретного цитокина (проточная цитофлюорометрия, методы биологического тестирования). В клинической практике с научными и диагностическими целями используют самые разнообразные методы (в зависимости от оснащенности иммунологической лаборатории):

• методы генотипирования;
• молекулярно-биологические методы;
• методы количественного определения растворимых цитокинов с помощью иммуноанализа;
• тестирование биологической активности цитокинов;
• выявление внутриклеточных цитокинов;
• метод ELISPOT, который позволяет определить единичные клетки, продуцирующие цитокины;
• иммунофлюоресценцию.

- Читать далее "Генно-молекулярные методы в иммунологии. Количественное определение цитокинов"

Оглавление темы "Оценка иммунного статуса организма":
1. Оценка иммунной системы. Иммунный статус
2. Тесты для оценки иммунного статуса. Расширенное обследование иммунитета
3. Материалы для исследования иммунитета. Понятие нормальный иммунный статус
4. Оценка распознования антигена. Оценка активации лимфоцитов
5. Оценка иммунорегуляторного звена. Показатели иммунорегуляторного звена иммунитета
6. Этиологическая оценка иммунитета. Фенотипирование клеток иммунной системы
7. Оценка системы цитокинов. Этапы комплексной оценки системы цитокинов
8. Генно-молекулярные методы в иммунологии. Количественное определение цитокинов
9. Биологическое тестирование цитокинов. Нарушения в системе цитокинов
10. Иммунная система ребенка. Физиологическое иммунодефицитное состояние