Итак, можно предположить следующую стратегию при определении числа независимых мест связывания лиганда с использованием МИМ. Необходимо на основании разумных допущений выбрать модель с максимально возможным числом центров связывания. Далее, используя выбранную модель, применить МИМ. Если модель необоснованно сложна, то корреляции оценок параметров Ki и [Ri]0 не будет и следует перейти к более простой модели, включающей меньшее число центров связывания. Подобную операцию следует проводить до тех пор, пока не проявится сильная линейная корреляция оценок параметров Ki и [Ri]o. Необходимо отметить, что предлагаемый метод позволяет произвести учет распределения экспериментальных точек в каждом конкретном эксперименте и получить обоснованные выводы даже при малом объеме эксперимента.

Использование метода имитационного моделирования для анализа процессов комплексообразования лигандов с центрами связывания позволило наряду с выбором критерия дискриминации моделей сделать два важных вывода. Во-первых, вид эмпирических функций распределения оценок параметров модели показывает несимметричность их доверительных интервалов. Следовательно, правильнее приводить ошибку определения параметров не в виде ± определенное значение, а давать границы доверительного интервала. Во-вторых, при переходе от системы с одним центром связывания к системам с большим числом центров резким образом возрастает ошибка определения параметров при обычном объеме эксперимента (20 - 30 точек). Например, для модели с одним центром комплексовбразования точность определения параметров составляет десяток процентов, а для двухцентровой модели величина ошибки может достигать 200 - 300%. Достаточно точно при этом (3 - 7%) определяются лишь соответствующие отношения параметров ([Ri]o/Ki).

Лиганд-рецепторные взаимодействия

Помимо гетерогенности рецепторов анализ процессов комплексообразования лигандов с рецепторами резко усложняют процессы неспецифического связывания (связывания не с рецепторами, а с различными другими мембранными компонентами, находящимися в большом избытке по сравнению с лигандом).

Обычно константа неспецифического связывания Кнс определяется независимо от других параметров модели на основании дополнительных экспериментов по специфическому связыванию (Варфоломеев, Зайцев, 1982; Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985), когда в условиях избытка немеченого лиганда измеряют концентрацию неспецифически связанного с рецепторами меченого лиганда. По этим данным с помощью линейного регрессионного анализа находят оценку Кнс для константы Кнс неспецифического связывания.

Совершенствуя методику эксперимента, можно добиться значительного уменьшения погрешности [В]общ, [L]. Иначе обстоит дело с ошибкой определения константы неспецифического связывания: эксперименты по определению неспецифического связывания проводятся в условиях избытка концентраций немеченого лиганда (Варфоломеев, 1982, 1985); получаемые при этом оценки КНс могут существенно отличаться как друг от друга при использовании различных концентраций немеченого лиганда, так и от истинного значения Кнс. В этом случае получаемые при анализе изотерм специфического связывания оценки параметров модели будут сильно отличаться от истинных значений.

- Читать далее "Константа неспецифического связывания. Анализ изотерм комплексообразования лигандов с рецепторами"