Выяснение морфологии клеток и отношения к окраске по Граму у сомнительных культур следует считать первоочередным, так как при этом исследовании могут быть выявлены характерные морфологические особенности (например, кокковая форма и др.), которые сразу же без других тестов дадут представление о микроорганизме. Известно, что при окраске гю Граму выявляется способность микроорганизмов удерживать или утрачивать окраску (генциан- и кристалвиолет) при последующем воздействии спиртом, в зависимости от чего их относят соответственно к грамположительным или к грамотрицательным.

Относительно механизма окраски микроорганизмов по Граму наиболее убедительной считают химическую теорию [Марков К. И., Бырдаров Св., 196]. В ее основе лежит установление различия в составе клеточной поверхности грамположительных и грамотрицательных бактерий. У первых на поверхности содержится в 8 раз больше рибонуклеата магния, чем дезоксирибонуклеата магния, а у вторых это соотношение составляет 1,3: 1,0. Предполагают, что рибонуклеат магния в грамположительных бактериях образует с генцианвиолетом и раствором Люголя слабо растворимое в спирте соединение, благодаря чему окраска этих бактерий сохраняется.

Как считают, в большинстве случаев интерпретация результатов окраски мазка по Граму не представляет трудностей, однако некоторые грамположительные микроорганизмы, в частности представители рода Bacillus, могут иметь грамотрицательную окраску. Напротив, некоторые штаммы грамотрицательных родов Acinetobacter и Moraxella проявляют тенденцию не обесцвечиваться спиртом, поэтому выглядят грамположительными.

Для уточнения таких «грамсомнительных» реакции предложены особые методы. Так, G. Сеrbу в 1976 г. описал метод дифференциации грамположительных и грамотрицательных бактерий, основанный на цветной реакции выявления аминопептидазы, которая в основном присуща грамотрицательным бактериям. Этот способ, хотя и быстрый (на процедуру затрачивается 10— 15 мин), но не вполне специфичен в отношении Bacillus.

В Японки значительно раньше применяли метод, позволяющий отличить с помощью КОН-теста грамотрицательные микроорганизмы от грамположительных. Возможно из-за того, что автор метода Е. Ryu описал его еще в 1938 г. на японском языке, метод этот до недавнего времени оставался достоянием указанной страны. Лишь после того, как метод был апробирован Т. Gregersen (1978) и опубликован в Европе, его стали применять в других странах,

При положительной реакции, свойственной грамотрицательным микроорганизмам, жидкость в капле становится вязкой, нити слизи тянутся за петлей на 0,5—2 см и даже дальше. Учет этой пробы более удобен на черном фоне.

Автор, исследовавший представителей 70 родов или видов грамлоложительных и грамотрицательных микроорганизмов, наблюдал четкие положительные реакции у энтеробактерий.

- Читать далее "Определение типа расщепления глюкозы бактериями. Оценка цитохромов бактерий"