Детекция результатов ПЦР, или ОТ/ПЦР

Существует несколько способов детекции (или просмотра) результатов ПЦР. Самым простым и удобным методом является электрофорез. Он проводится в агарозном или полиакриламидном геле; оба содержат бромистый этидий (химический агент, который связывается с двойной цепью ДНК и светится при УФ-облучении).

Иногда вместо бромистого этидия гель окрашивают ионами серебра. После проведения ПЦР продукты реакции могут быть дополнительно обработаны рестрикционными эндонуклеазами (ферментами, разрезающими ДНК в строго определенных местах). После такой дополнительной обработки проводится анализ полученных фрагментов методом электрофореза. Такой метод часто используется в генетике.

Результаты ПЦР можно контролировать при помощи неизотопной колориметрической детекции ПЦР-продуктов. ДНК метят биотином (обычно используют биотинилированые праймеры). После проведения ПЦР все фрагменты ДНК оказываются биотинилированными. Меченую биотином ДНК переносят на твердый носитель (мембрану) и к ней добавляют авидин-пероксидазный комплекс.

Затем проводят цветную пероксидазную реакцию с субстратом. Количество амплификата можно определить по интенсивности цветной реакции. Данный метод аналогичен детекции при постановке иммуноферментного анализа. Праймеры можно модифицировать, используя различные флуоресцентные красители. Тогда после проведения ПЦР продукты реакции можно анализировать путем флуориметрии.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.