Гнездовая ПЦР (nested)

Большинство тест-систем рассчитано на 30-40 циклов ПЦР. Однако при проведении 40 циклов на матрице, выделенной из биологического материала, может происходить накопление неспецифических продуктов. Поэтому для получения более четкого сигнала целесообразно снизить количество циклов до 25-30. Но в случае определения микроорганизма, содержащегося в низкой концентрации, такое число циклов оказывается недостаточным. Тогда следует использовать гнездовую ПЦР, или nested PCR. Схема проведения гнездовой ПЦР представлена на рисунке ниже.

Гнездовая ПЦР
Схема гнездовой (nested) ПЦР.

Данная модификация предполагает проведение двух ПЦР последовательно: после первой реакции проводится реамплификация, т. е. вторая ПЦР, при которой в качестве матрицы используется продукт первой реакции. Праймеры для гнездовой ПЦР подбираются с таким расчетом, чтобы места гибридизации праймеров для второй ПЦР находились внутри участка ДНК, ограниченного праймерами для первой ПЦР.

Таким образом, специфический продукт первой ПЦР может служить матрицей для второй, а неспецифические продукты, если они образуются в течение первой реакции, выступать в роли матрицы во второй ПЦР не могут. Гнездовая ПЦР требует несколько большего времени, но позволяет добиться многократного повышения чувствительности анализа. Также существенно повышается специфичность анализа.

- Читать далее "Детекция результатов ПЦР, или ОТ/ПЦР"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.