Материалом для микробиологического исследования является отделяемое язвы (язв) и гноя из бубонов. При взятии материала из язвы необходимо максимально предотвратить попадание в образец кожной микрофлоры. Следует также помнить что всегда возможно наличие смешанной инфекции (мягкий и твердый шанкр, т.е. сифилис), и поэтому параллельно надо искать второго возбудителя. Края язвы и ее поверхность необходимо тщательно очистить ватным тампоном, пропитанным изотоническим раствором хлорида натрия.

Материал берется стерильной платиновой петлей или специальной палочкой либо лопаточкой со дна язвы и из-под ее краев с захватом кусочка ткани.

Из образца готовят два препарата-мазка, фиксированные на пламени. Один из них окрашивают обычной анилиновой краской (водным или щелочным раствором метиленового синего, фуксином Пфейффера), а другой - по Граму. Препараты микроскопируют с иммерсией. В мазках следует искать цепочки грамотрицательных диплобактерий, располагающихся параллельными рядами («стайки рыб», «рельсы») между форменными элементами. На поздних сроках развития язвы можно увидеть палочки внутри фагоцитов.

Так как окраска но Граму травмирует форменные элементы, то для выявления фагоцитированных клеток параллельно просматривают мазок, окрашенный простым методом. Чувствительность метода микроскопии материала из язв составляет 60%, специфичность метода не поддается оценке из-за нахождения в препаратах посторонних грамотрицательных палочек. Поэтому на основании бактериоскопии выдается лишь предварительный (положительный или отрицательный) ответ.

Гной из бубона берут прокаленной петлей (если бубон самопроизвольно вскрылся) или стерильной иглой, соединенной со шприцем (пункция). В материале из бубона содержится меньше возбудителя, но зато он почти не обсеменен посторонней микрофлорой, особенно пунктат. Поэтому метод микроскопии бубонного материала менее чувствителен, но зато более специфичен.

Для получения точного ответа необходимо провести бактериологическое исследование. Материал для этого из язвы или бубона берут отдельно, независимо от взятия образца для микроскопии, с соблюдением правил стерильности.

Первый день исследования. Взятый образец немедленно засевают на плотную среду в чашке Петри. Для первичного посева используют «шоколадно»-кровяной агар с кровью барана, лошади, кролика, в который добавляют ванкомицин или линкомицин (из расчета 3-5 мг/мл готовой среды) для подавления посторонней микрофлоры. В качестве питательной основы можно взять агар на переваре Хоттигнера (1,5 г/л амминного азота), сухие коммерческие основы — GC-arap, агар Мюллера-Хинтона, среду АГВ, сердечно-мозговой агар (т.е. основы, пригодные для культивирования Н. influenzae. Рост возбудителя усиливается при использовании коммерческой добавки IsoVitaleX и т.п. Среда в чашке должна быть свежеприготовленной.

Второй день. Через 24, чаще 48-96 ч появляются типичные колонии. Из них готовят препараты-мазки, окрашенные по Граму. Обнаружение типичных грамотрицательных диплострептобактерий в сочетании с отрицательными пробами на оксидазу и каталазу, но при наличии нитрат-редуктазы позволяет выдать положительный ответ. Для окончательного подтверждения можно сделать посев выделенной культуры на среды с глюкозой и другими углеводами, содержащие гемин и индикатор.

Третий день. Через 5-6 дней учитывают результаты посевов на среды с углеводами. H.ducreyi иногда медленно разлагает глюкозу. Остальные углеводы не изменяются.

Определение чувствительности к антибиотикам проводится диско-диффузионным методом на «шоколадно»-кровяном агаре Мюллера-Хинтона.

Сохранение выделенной культуры Н. ducreyi. Наилучшим способом сохранения является лиофильное высушивание. В течение 1 мес. культуру можно сохранять в полужидком (0,25%) питательном агаре с 1% крахмала и 20% дефибринированной крови.

В качестве экспресс-диагностики рекомендуется использовать ПЦР, чувствительность которой при мягком шанкре достигает 95%. Микроскопию материала из язвы или бубона также можно считать экспресс-методом в случае обнаружения в материале грамотрицательных диплострептобактерий.

Серологическая диагностика мягкого шанкра не проводится, гак как не разработаны соответствующие методы в связи с отсутствием знаний о специфических антигенах возбудителя.

- Читать далее "Бруцеллы (возбудители бруцеллеза, Brucella): морфология, культуральные свойства"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.1.2020