Количественное определение циркулирующих антител и антигенов (тест-системы на основе конкурентного ИФА)
Для определения концентрации Ат и Аг используют тест-системы, разработанные на основе конкурентного ИФА. При выполнении такого исследования, в отличие от непрямого ИФА, в лунки со специфическим иммуносорбентом добавляют тестируемую сыворотку одновременно с конъюгатом.
В случае положительного результата происходит конкуренция между выявляемыми в сыворотке Ат или Аг с молекулами конъюгата, представленными идентичными Ат или Аг, меченными ферментом. Такая конкуренция возможна потому, что рабочее разведение конъюгата в тест-системе приготавливается в концентрации, эквимолярной (примерно равной) концентрации молекул иммуносорбента, т. е. в случае отрицательного результата все молекулы конъюгата прореагируют с иммуносорбентом. После проведения реакции энзим-субстрат ОП окраски в лунке с отрицательной сывороткой будет максимальной.
Наличие же в сыворотке специфичных молекул Ат или Аг приводит к сдвигу равновесия, к уменьшению концентрации связанного конъюгата и снижению величины ОП окраски в соответствующей лунке.
В количественные тест-системы на основе конкурентного ИФА, помимо контролей, входит набор калибраторов, которые используются в каждом исследовании для построения калибровочной кривой зависимости ОП от концентрации. После измерения ОП в лунках с тестируемыми сыворотками по графику определяют концентрацию выявляемых Аг или Ат.
В современных программируемых фотометрах построение графика и определение концентрации производится автоматически но заданной программе. Исследования при помощи конкурентного анализа занимают меньше времени и являются весьма чувствительными. Используются также в комплексе с непрямым ИФА для подтверждения результатов первичного скрининга.
I — после инкубации и последующего отмывания в К- остаются только молекулы конъюгата; а в К+ (высокоположительный) — молекулы конъюгата остутствуют;
II — внесение субстратной смеси;
III — учет результатов по калибровочному графику;
1 — иммуносорбент с Аг; 2 — неспецифические иммуноглобулины;
3 — конъюгат; 4 — выявляемые Ат.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.09.2019
- Количественное определение циркулирующих антител и антигенов (тест-системы на основе конкурентного ИФА)
- ELISPOT — иммуноферментный тест с локальным связыванием для качественного выявления выработки антител и интерлейкинов на клеточном уровне в системе in vitro
- Основные требования к иммунодиагностике инфекционных заболеваний методом ИФА