Для проведения идентификации при визуальном считывании коммерческих тест-систем в бланке анализа на требуемом номере микроорганизма нажатием правой клавиши мыши вызвать контекстное меню. В данном меню выбрать команду «Идентифицировать...», в результате на экране появится диалог по идентификации.

Выбор банка производится по результатам первичной дифференциации идентифицируемого микроорганизма.

Выбор необходимого банка осуществляется через выпадающий список в поле «Банки идентификации».

При идентификации оксидазонегативной культуры с использованием тест-системы ММТ Е24 это будет банк «Оксидаза-Грам-.», для идентификации энтерококков выбирается банк «Энтерококки», после чего появляется экранная форма с перечнем всех тестов, заложенных в банк данных на эту группу микроорганизмов.

При проведении идентификации визуально учитывают результаты выполненных планшетных тестов, тестов при помощи диагностических полосок и дополнительных тестов (морфология, рост на среде Эндо, гемолиз, подвижность, ферментация глюкозы, оксидаза, пигмент и др.), отмечая их [+] при положительной реакции, [-] при отрицательной и [?] при нечеткой реакции. Например, при работе с банком «Энтерококки» интерпретация результатов планшетных биохимических реакций может выглядеть следующим образом.

Как видно из рисунка, перечень не ограничивается только планшетными тестами (в тест-системе их восемь), а включает ряд дополнительных биохимических и других тестов, которые используются для идентификации энтерококков.

Из рисунка ниже видно, что попытка проведения идентификации по восьми планшетным тестам с добавлением одного обязательного теста на диагностической полоске VPT-тест не удалась. При просмотре «Несовпавших тестов» выявлено их отсутствие.

При анализе дополнительных тестов выявлено два теста: на лактозу и рибозу, которые должны быть положительными у первой культуры в 95 и 97 % случаев соответственно и отрицательными — у второй.

При внесении теста на лактозу, который у первой культуры оказался положительным, результатом идентификации оказался Enterococcus faecalis.

После завершения ввода результатов тестов программа проводит расчет результатов идентификации, включающих следующие параметры:

1. Наименование наиболее вероятного или вероятных микроорганизмов из имеющихся в банке данных.

2. Подобие (вероятность или % идентификации) — показатель, указывающий, насколько полученный профиль соответствует идентифицированному микробу по сравнению с другими таксонами, включенными в данный банк данных. Этот показатель может варьироваться от 0 до 100 %.

3. Т-индекс — показывающий, насколько идентифицированный микроб по своему профилю соответствует данному таксону. Этот показатель колеблется от 0 до 1 и обратно пропорционален количеству атипичных тестов.

4. Качественную оценку идентификации, которая определяется соотношением % идентификации и Т-индекса: «отличная» — % идентификации —99,9 и более, Т-индекс — 0,75 и более, «очень хорошая» — % идентификации - 99,0 и более, Т-индекс — 0,50 и более, «хорошая» — % идентификации — 90,0 и более, Т-индекс — 0,25 и более, «приемлемая» — % идентификации — 85,0 и более, Т-индекс — 0,10 и более.

5. Данные о несовпадающих (атипичных) тестах в полученном профиле для каждого из вероятных таксонов с процентом положительных реакций, заложенных в банке.

6. Перечень дополнительных разделительных тестов в случае получения двух и более вероятных культур с указанием процента положительных реакций для каждого теста и таксона; после выполнения и внесения рекомендуемых дополнительных тестов программа позволяет провести повторную идентификацию культуры.

7. Идентификацию до рода или группы микроорганизмов одного рода в случае неудовлетворительной идентификации каждого из выбранных таксонов, но в сумме дающих для двух и более таксонов одного родового наименования удовлетворительные показатели.

В практической работе следует обращать особое внимание на те случаи, когда в таблице результатов идентификации появляются редко встречающиеся виды бактерий, причем для них нет ни одного несовпадающего с банком данных теста. В этих случаях для подтверждения результата рекомендуется повторить исследование с постановкой дополнительных тестов, приготовив суспензию из популяции, выращенной из отдельной колонии на неселективной среде, полностью исключив возможность присутствия примеси посторонних микроорганизмов, особенно медленно растущих.

Опыт работы с коммерческими тест-системами и компьютерной идентификации микроорганизмов позволяет нам дать дополнительные рекомендации для получения более убедительного результата верификации. Так, при идентификации бактерий из семейств Enterobacteriaceae, Aeromonadaceae и Vibrionaceae (банк данных «Грамотрицательные ферментирующие бактерии»), а также бактерий семейства Enterobacteriaceae и некоторых оксидазоотрицательных неферментирующих бактерий (банк данных «Оксидазоотрицательные грамотрицательные бактерии») при использовании мультимикротестов ММТ Е24, ENTEROtestl6 и ENTEROtest24 целесообразно дополнительно к результатам тестов в планшетах и на диагностических полосках вносить результаты тестов утилизации глюкозы на среде Хью-Лейфсона, на газообразование из глюкозы, оксидазную активность, подвижность культуры, наличие пигмента.

Для компьютерной идентификации оксидазоположительных грамотрицательных микроорганизмов при использовании микротест-систем NEFERMtest24 (банк данных «Оксидазоположительные грамотрицательные бактерии») в качестве дополнительных к планшетным необходимо внести показатели следующих тестов: ОКСИтест, утилизация глюкозы на среде Хью-Лейфсона, рост на среде Эндо, на подвижность, наличие пигмента, а при использовании среды Клиглера (Олькеницкого) — на наличие сероводорода.

При компьютерной идентификации стафилококков с использованием микротест-систем STAPHYtestl6 рекомендуется дополнительно к планшетным тестам вносить результаты ВПтеста, теста на наличие или отсутствие гемолиза, каратиноидного пигмента, а в ряде случаев — и результат реакции плазмокоагуляции.

Для идентификации стрептококков при использовании микротест-систем STREPTOtestl6 следует дополнительно к планшетным тестам внести данные теста на наличие бета-гемолиза, результаты ВП- и ПИРАтестов.

При идентификации энтерококков, кроме планшетных тестов ENCOCUStest и результата ПИР-теста, желательно внести результаты тестов на наличие гемолиза, пигмента, подвижности.

Для компьютерной идентификации анаэробов с использованием микротест-систем ANAEROtest23 помимо результатов тестов, получаемых на индикаторных средах, необходимо внести данные о морфологии микроорганизмов, отношении к окраске по Граму, наличии или отсутствии спорообразования для разделения микроорганизмов на подгруппы, наличие черного пигмента, газообразования.

При проведении идентификации грибов с использованием коммерческой тест-системы Auxacolor2 после внесения результатов тестов, полученных в микроплашке, добавить данные о наличии пигмента, артроспор, капсул, росте при 37 °С и др.

При всех достоинствах и преимуществах программы «Идентификация» в случае большого объема выполняемых исследований визуальное считывание биохимических тестов и внесение их вручную в экранную форму для последующей компьютерной обработки желательно заменить на автоматическое с использованием приборов ридеров.

- Читать далее "Программа «МИКРОБ-АВТОМАТ» для автоматизации проведения микробиологических исследований"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.09.2019