а) Желчно-эскулиновый агар с азидом натрия — селективный агар для выделения энтерококков и стрептококков группы D и предварительной идентификации энтерококков. Hi Media, Bile Esculine Azide Agar. Готовить по инструкции производителя.

Азид подавляет рост грамотрицательных микроорганизмов. Гидролиз эскулина и толерантность к желчи позволяют выделить и идентифицировать энтерококки и стрептококк группы D в течение 24 ч.

б) Питательная среда для выделения энтерококков из клинического материала, сухая (ГНЦП, г. Оболенск). Готовить по инструкции производителя.

Готовая среда, разлитая в чашки Петри, сохраняется в холодильнике при 46°С в течение 7-10 суток.

в) Селективная среда — колумбийский агар с кровью и антибиотиками. В качестве основы используется сухой колумбийский агар (Columbia agar Base, «Hi Media»). Навеску сухого колумбийского агара 44,0 г суспендируют в 1000 мл дистиллированной воды и нагревают до полного растворения. Устанавливают pH. Стерилизуют при 121°С 15 мин. В расплавленную и охлажденную до 45°С среду добавляют 5% дефибринированной подогретой крови барана, лошади или кролика. Для придания среде селективности одновременно в среду вносят антибиотики, подавляющие грамотрицательную флору — колистин до конечной концентрации 10,0 мкг/мл и налидиксовую кислоту из расчета 15,0 мкг/мл. Использование оксолиновой кислоты (5 мкг/мл) вместо налидиксовой приводит к подавлению не только грамотрицательной сопутствующей флоры, но также стафилококка и коринебактерий.

г) Желчно-щелочной агар. Состав:
• питательный агар (сухой) — 35,0 г,
• автолизат дрожжей — 20 мл,
• глюкоза — 10,0 г,
• вода дистиллированная — 600 мл.
• карбонат натрия (Na₂CO₃) — 5,0 г,
• свежая бычья желчь — 400 мл,
• pH среды — 9,8 ± 0,4

Агар растворяют в воде, подогревают до полного растворения, фильтруют, добавляют остальные ингредиенты. Готовую среду стерилизуют при 112°С 15 мин. Перед разливкой в чашки Петри в остуженную среду вносят 50 мл свежей крови (барана, кролика, человека), 12,5 мл 0,01 %-ного раствора кристаллического фиолетового.

д) ЛАП-тест и ПИР (PYR)-тест для предварительной идентификации энтерококков и др. не β-гемолитических грамположительных кокков (по Facklam et al., 1995), представителей родов Leuconostoc и Pediococcus. Используют готовые диски для постановки ЛАП- и ПИР-тестов, а также диски с ванкомицином (30 мкг), проводят испытуемую культуру по соответствующим тестам.

При ЛАП+ и ПИР+ культуру оценивают как энтерококк, при ЛАП- и ПИР— как представителя рода Leuconostoc, а при ЛАП+ и ПИР- как рода Pediococcus.

е) Среда для определения устойчивости (толерантности) к теллуриту. К 100 мл расплавленного и охлажденного питательного агара асептично добавляют 2 мл 2 %-ного раствора теллурита калия (К₂ТеО₃) и 10 мл свежей дефибринированной крови барана, лошади или человека. Кровь, содержащая различные консервирующие добавки, непригодна.

Приготовление раствора теллурита калия. Готовят 2%-ный раствор в дистиллированной воде на кипящей водяной бане. Хранят в холодильнике не дольше 1 месяца. Перед употреблением в случае образования осадка раствор снова прогревают в водяной бане до исчезновения хлопьев.

Среду, разлитую в стерильные чашки Петри или пробирки, хранят в холодильнике не более 7 суток.

Испытуемые культуры засевают на поверхность агара, инкубируют 24-48 ч. При положительном результате на поверхности агара образуются колонии черного цвета. Некоторые штаммы E.faecium формируют серые колонии, такой результат считается отрицательным.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.6.2020