Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Изучение антидетерминанты. Метод метки по сродству

Второй этап изучения антидетерминанты — доказательство самосборки активного центра при реконструкции молекулы антитела из изолированных цепей (Ф. Франек, Р. Незлин, 1964; J. Edelman, 1963). Тогда же была продемонстрирована возможность спонтанной реконструкции антидетерминанты из полипептидных цепей, развернутых предварительно под влиянием денатурирующих агентов в присутствии восстановителей (М. Fridman, M. Sela, 1966). Именно с этого момента можно считать окончательно утратившими значение идеи о прямом участии антигена (гаптена) в формировании полости антидетерминанты.

Третий этап — создание метода «метки по сродству» с целью идентификации аминокислотных остатков непосредственно в активном центре (L. Wofsy, H. Metzger, S. Singer, 1962—1964). Сущность метода состоит в том, что гаптен в форме реакционноспособного производного, связываясь с высокой скоростью в активном центре специфичного к нему антитела, обеспечивает взаимодействие реакционноспособной группы с радикалами непосредственно в активном центре.

К настоящему времени синтезировано большое число различных реакционноспособных производных гаптенов, избирательно реагирующих с разными аминокислотными остатками. В ходе реакции образуются устойчивые ковалентные связи, поэтому, разделив полипептидные цепи и фрагментировав их, можно точно локализовать меченый аминокислотный остаток.

Таким способом удалось установить, что оба вариабельных домена (от легкой и тяжелой цепей) участвуют своими аминокислотными остатками в формировании полости активного центра и что полость центра «выстилают» отрезки цепей, соответствующие гипервариабельным участкам. Данные, накопленные с помощью метода «метки по сродству», были дополнены результатами, полученными методами дифференциальной спектрофотометрии и электроннопарамагнитного резонанса, а также химической модификации определенных аминокислотных остатков в молекуле антитела.

антидетерминанты

Для ряда гаптенов гидрофобного характера (например, нитрофенильные производные) было доказано присутствие в активном центре антитела остатка триптофана, продемонстрирован гидрофобный характер полости антидетерминанты. Для других гаптенов установлена локализация остатков гистидина, лизина, тирозина и точно определено их местоположение в каждой цепи.

Заключительный этап изучения антидетерминанты — получение в кристаллической форме Fab-фрагментов моноклональных иммуноглобулинов, специфически связывающих определенные гаптены, и рентгеноструктурныи анализ кристаллов, образованных комплексами фрагмента антитела с соответствующим гаптелом. В этих исследованиях, выполненных в последние годы, были подтверждены и развиты представления, сформулированные на основании многих работ по структуре антител.

Рентгеноструктурный анализ подтвердил участие гипервариабельных сегментов в формировании полости антидетсрминанты. Примером может служить изучение Fab-фрагмента моноклонального миеломного иммуноглобулина человека New, который в числе ряда лигандов связывает также гидроксильное производное витамина K, имея к этому лиганду сравнительно высокое сродство (Kа= 105М-1). Гипервариабельные участки образуют неглубокие выемки, так что центр имеет размеры 1,6X0,7 нм2 при глубине 0,6 нм.

Ароматическая менадионовая группа гаптена находится в непосредственном контакте с остатками ароматических аминокислот: тирозином и триптофаном. Этим остаткам принадлежит, очевидно, основная роль в «удержании» менадионовой группировки (2-метил-1,4-нафтохинон) в полости активного центра.

- Читать далее "Гипервариабельные участки иммуноглобулинов. Конфигурационная ассиметрия участков иммуноглобулинов"

Оглавление темы "Гены иммуноглобулинов":
1. Изучение антидетерминанты. Метод метки по сродству
2. Гипервариабельные участки иммуноглобулинов. Конфигурационная ассиметрия участков иммуноглобулинов
3. Вид активного центра иммуноглобулинов. Неспецифические или нормальные иммуноглобулины
4. Рентгеноструктурный анализ иммуноглобулинов. Полиспецифичность моноклональных иммуноглобулинов
5. Организация структуры антидетерминанты. Реакция гаптен-антитело
6. Кинетика реакции гаптен-антитело. Термодинамика реакции гаптен-антитело
7. Взаимодействия гаптен-антитело. Биосинтез иммуноглобулинов
8. Организация иммуноглобулиновых генов. Гены для тяжелых цепей иммуноглобулинов
9. Кодирование цепей иммуноглобулинов. Рекомбинации экзонов иммуноглобулинов
10. Причины вариации генов иммуноглобулинов. Реарранжировка генетического материала иммуноглобулинов