Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Организация структуры антидетерминанты. Реакция гаптен-антитело

Детерминанта включает в себя не только гипервариабельные участки цепей, но и опорные структуры, стабилизирующие ее конфигурацию. Эти опорные структуры образуются инвариантными участками аминокислотной последовательности V-районов. Степень участия каждого из них в стабилизации антидетерминанты не известна. Не вызывает сомнения, что большой вклад в формирование антидетерминанты вносят короткодействующие неполярные связи. Значительная роль принадлежит ароматическим остаткам и в первую очередь остаткам триптофана. Так, показано, что избирательное окисление остатков триптофана N-бромсукцинимидом в мочевине приводит к разрушению антидетерминанты вне зависимости от специфичности антител.

Выше упоминалось, что находящийся в активном центре лиганд оказывает стабилизирующее влияние на структуру центра. Изящное подтверждение этому было получено, в частности, А. Гроссбергом с соавторами (A. Grossberg et al., 1965), изучавшими чувствительность к протеолизу химотрипсином очищенных антител против азофениларсоната и азофенилтриметиламмония до и после добавления гаптена. Антитела метили радиоактивным иодом и об интенсивности протеолиза судили по появлению низкомолекулярных меченых пептидов. При этом свободное антитело метили одним радиоизотопом иода (131I), а связанное с гаптеном — другим (125I). После 5 ч переваривания 10% радиоактивности находилось в составе низкомолекулярных пептидов, содержащихся в гидролизате свободных антител, и 7% — в гидролизате при проведении реакции в присутствии гаптена.

Увеличение резистентности антитела к протеолизу в присутствии гаптена продемонстрировано также на других моделях с использованием как химотрипсина, так и субтилизина. Показано, что гаптен влияет на чувствительность к протеолизу именно Fab-фрагмента, более точно участки расщепления не были локализованы. Полученные результаты интерпретируют как доказательство изменения конформации активного центра под влиянием гаптена и стабилизации конформации участка молекулы антитела, содержащего антидетерминаиту.

антигенные детерминанты

Реакция гаптен-антитело

Получение экспериментальных данных, необходимых для вычисления основных параметров реакции антитела со специфическим лигандом, возможно с достаточной точностью лишь в том случае, когда лиганд одновалентен и как всякий одновалентный гаптен не ведет к образованию больших по размеру и сложных по составу агрегатов. В случае образования комплексов, состоящих из нескольких молекул антигена и антитела, система настолько усложняется, что реакция не может быть описана простыми уравнениями.

Источником антител для оценки кинетических параметров реакции служили до последнего времени очищенные антитела против простых гаптенов и моноклональные миеломные иммуноглобулины с гаптенсвязывающей активностью. Первые из них неоднородны в том числе и по степени сродства (скорость реакции) с лигандом. Поэтому в подобных случаях получают лишь усредненные значения тех или иных параметров.

В ходе реакции гаптен-антитело (когда гаптен имеет небольшую молекулярную массу и одновалентен) не происходит никаких взаимных превращений гаптена и антитела. Поэтому о их взаимодействии судят с помощью различных физических и физико-химических методов. Эти методы основаны на оценке количества связанного гаптена по изменению диффузионного равновесия последнего в присутствии антитела (метод равновесного диализа) или по изменению оптических свойств гаптена после его связывания антителом.

- Читать далее "Кинетика реакции гаптен-антитело. Термодинамика реакции гаптен-антитело"

Оглавление темы "Гены иммуноглобулинов":
1. Изучение антидетерминанты. Метод метки по сродству
2. Гипервариабельные участки иммуноглобулинов. Конфигурационная ассиметрия участков иммуноглобулинов
3. Вид активного центра иммуноглобулинов. Неспецифические или нормальные иммуноглобулины
4. Рентгеноструктурный анализ иммуноглобулинов. Полиспецифичность моноклональных иммуноглобулинов
5. Организация структуры антидетерминанты. Реакция гаптен-антитело
6. Кинетика реакции гаптен-антитело. Термодинамика реакции гаптен-антитело
7. Взаимодействия гаптен-антитело. Биосинтез иммуноглобулинов
8. Организация иммуноглобулиновых генов. Гены для тяжелых цепей иммуноглобулинов
9. Кодирование цепей иммуноглобулинов. Рекомбинации экзонов иммуноглобулинов
10. Причины вариации генов иммуноглобулинов. Реарранжировка генетического материала иммуноглобулинов