Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Технология производства культуральной антирабической вакцины

В нашей стране исследования по культуральной антирабической вакцине выполнялись в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН и имели следующие направления и этапы:
а) 1963—1965 гг.— изготовление лабораторных образцов вакцины и испытание ее антигенной, иммуногенной активности и безвредности в опытах на различных животных и добровольцах (Селимов и др., Selimov, Aksenova).
б) 1966—1969 гг.— организация экспериментального производства вакцины и испытание ее антигенной активности и реактогенности в опытах лечебной и профилактической иммунизации 1000 людей (М. А. Селимов и др.);
в) 1970—1973 гг.— организация серийного экспериментального производства вакцины и испытание ее эффективности и реактогенности в опытах лечебной иммунизации 10 000 человек;
г) 1974 г.— организация промышленного производства вакцины и передача ее в практику здравоохранения для лечебной иммунизации людей.

Технология производства вакцины в основном состоит из следующих этапов: трипсинизация почек, выращивание монослоя клеток, заражение клеток и их инкубирование, сбор вируссодержащеи культуральной жидкости, сведение в серию, осветление, инактивация вируса, розлив во флаконы, лиофилизация.

культуральная антирабическая вакцина

Трипсинизация тканей почки проводится 0,25% химически чистым раствором трипсина в специальной колбе при комнатной температуре и постоянном размешивании на магнитной мешалке. После трехкратного отмывания клетки суспендируют в 0,5% растворе гидролизата лактальбумина (ГЛА) на солевом растворе Хенкса — рН 7,0—7,1, содержащем 10% нормальной бычьей сыворотки (МБС) в концентрации 400 000 клеток в 1 мл, и в общем объеме 300 мл вносят в полуторалитровые клинские матрасы и инкубируют при температуре 37°С. Через 3 суток старую ростовую среду удаляют и заменяют таким же количеством свежей ростовой среды, но приготовленной па растворе Хенкса рН 7,0.

Спустя 5—6 сут с момента посадки матрасы со сплошным монослоем, без признаков дегенерации, отбирают для заражения: среду удаляют, клетки отмывают 3 раза 150 мл солевого раствора и вносят посевной вирус в дозе 0,01—0,001 LDso на одну клетку. Сорбция проходит при 22°С в течение часа. Затем в каждый матрас вносят 300 мл 0,5% ГЛА на растворе Эрла рН 7,4, содержащем 3% человеческого альбумина. Зараженные клетки инкубируют при 32°С. Сбор вируса проводят через сифон, начиная с 5-го дня после заражения с интервалами в 2—3 дня. Вирус собирают с матрасов со сплошным монослоем. Вируссодержащая культуральная жидкость, собранная одновременно с одной серии клеточной культуры, составляет первичный сбор.

Последний сохраняется при температуре —20°С. После соответствующих контрольных исследований проб первичного сбора составляют серию полуфабриката в объеме 15—30 л. Вируссодержащую культуральную жидкость осветляют путем центрифугирования в сепараторе типа ЛСГ-3 со скоростью протока 15 л/ч или путем фильтрации через крупнопористые фильтры. Вакцину инактивируют в иррадиаторе ультрафиолетовых лучей (УФЛ) со скоростью 65 мл/мин; расстояние от источника УФЛ до поверхности вращающегося диска 18 см. На вращающейся поверхности диска вакцина распределяется толщиной менее 1 мм (В. М. Морогова и др., 1973). Перед розливом в вакцину добавляют 10% раствор желатина и 75% раствор сахарозы, стерилизованные путем автоклавирования так, чтобы конечная концентрация желатина и сахарозы в вакцине составляла 1% и 7,5% соответственно. Вакцину разливают на поточной автоматической линии во флаконы из нейтрального стекла по 3 мл, замораживают при температуре —60—65°С и лиофилилируют.

Контролируют вакцину на производстве, в Отделе биологического контроля института (ОБК) и в ГИСК. Контрольным исследованиям подвергаются сирийские хомяки, клеточные культуры, вакцинный штамм, посевной вирус, первичный и объединенный сбор вируса и готовая вакцина. Очень большое внимание уделяется контролю на возможное загрязнение вакцины микроорганизмами, включая микоплазму (PPLO) и микобактерии туберкулеза. Путем посевов на чувствительные синтетические среды подвергают проверке клеточные культуры, вакцинный штамм, посевной вирус, первичный и объединенный сбор, готовую вакцину. Вакцинный штамм, кроме того, проверяют на антигенную специфичность (реакция нейтрализации на мышах с коммерческим антирабическим гамма-глобулином), индекс нейтрализации должен быть не ниже 4,0 LD50, спонтанные вирусы в культуре клеток ПСХ, диплоидных клеток человека, морских свинок, куриных эмбрионов, взрослых и новорожденных мышей, заражая их исследуемым материалом после нейтрализации антирабическим гамма-глобулином.

- Читать далее "Контроль иммуногенной активности вакцин от бешенства"

Оглавление темы "Вакцинация от бешенства":
  1. Прививки от бешенства в нашей стране. Качество антирабической помощи
  2. Живые вакцины от бешенства. Модификация Ферми
  3. Инактивированные вакцины от бешенства. Вакцина Семпла
  4. Мозговая вакцина от бешенства инактивируемая бета-пропиолактоном (БПЛ)
  5. Вакцина от бешенства из мозга новорожденных животных
  6. Лиофилизированные феноловые антирабические вакцины
  7. Авианизированные антирабические вакцины
  8. Культуральная антирабическая вакцина. Вакцина Института Мерье
  9. Технология производства культуральной антирабической вакцины
  10. Контроль иммуногенной активности вакцин от бешенства