Определение холестерина желчи. Методика определения холестерина

Качественное определение холестерина. К 10 мл дуоденального содержимого прибавляют 40 мл 1 % раствора соды и 60 мл 90° спирта. Полученную смесь ставят в водяную баню на 25 минут. К остывшей смеси добавляют 2—3 капли соляной кислоты и обрабатывают в делительной воронке эфиром.

К 10 мл полученной эфирной вытяжки добавляют 20 капель ангидрида уксусной кислоты и одну каплю концентрированной серной кислоты. При наличии холестерина жидкость окрашивается в красный цвет, переходящий постепенно в зеленый.

Количественное определение холестерина Реактивы: 1) 25% раствор едкого кали или натра; 2) хлороформ чистый; 3) безводный сернокислый натрий; 4) уксусный ангидрид (СН3СОО ОС СНз); 5) серная кислота концентрирования; 6) стандартный раствор холестерина (0,1 г холестерина растворяют в 100 мл хлороформа; 1 мл раствора содержит 1 мг холестерина. Сохранять в хорошо закрытой посуде в темном и прохладном месте).

Оборудование: 1) пипетка градуированная, емкостью в 1 мл; 2) колба мерная на 25 мл; 3) колба емкостью в 50 мл и эрленмейеровская колба емкостью в 30 мл; 4) делительная воронка емкостью до 50 мл; 5) колориметр.

Методика определения. В эрленмейеровскую колбочку вливают 1 мл желчи и 10 мл едкого кали (реактива 1), хорошо смешивают и ставят в кипящую водяную баню на 2—3 часа, жидкость взбалтывают в течение этого времени 4—5 раз. После этого жидкость оставляет до полного ее охлаждения, а затем переливают в делительную воронку. Колбу, в которой была жидкость, ополаскивают 10 мл хлороформа, который также вливают в делительную воронку.

Жидкость энергично взбалтывают. Хлороформ, осевший на дно, спускают в сухую колбочку. В делительную воронку приливают еще 8 мл хлороформа, опять сильно взбалтывают и когда хлороформ отстоится, его также спускают в ту же колбочку с хлороформом. В делительную воронку доливают в третий раз хлороформ в количестве 5 мл и после энергичного взбалтывания осевший хлороформ присоединяют к предыдущему. Таким способом образуется хлороформенная вытяжка, мутная вследствие наличия воды.

В колбочку с хлороформенной вытяжкой всыпают 5 г безводного сернокислого натра, поглощающего воду (реактив 3), и хорошо взбалтывают, жидкость становится прозрачной.
Жидкость фильтруют через сухой фильтр в сухую мерную колбу емкостью в 25 мл, ополаскивают пустую колбочку небольшим количеством хлороформа (3—4 мл), который затем приливают в мерную колбу, доливают хлороформом до метки, после чего все содержимое колбы хорошо смешивают. В сухую пробирку вливают 10 мл приготовленной хлороформенной вытяжки, 4 мл уксусного ангидрида (реактив 4) и 0,2 мл серной кислоты (реактив 5), хорошо смешивают и закрывают плотно пробкой.

Для приготовления стандартного раствора 2 мл раствора, содержащего 2 мг холестерина (реактив 6), вливают в мерную колбу емкостью 25 мл, доливают хлороформом до метки, хорошо взбалтывают и 10 мл этой жидкости наливают в сухую, чистую пробирку, добавляют 4 мл уксусного ангидрида и 0,2 мл серной кислоты, хорошо смешивают и закрывают пробирку плотно пробкой.

Обе пробирки с приготовленными растворами оставляют в темном месте при температуре 32—35° в водяной бане на 15— 20 минут, после чего колориметрируют.
Для вычисления количества холестерина в испытуемой жидкости при колориметрировании исходят из следующих соображений. В 25 мл приготовленного стандартного раствора содержится 2 мг холестерина. Следовательно, в 25 мл испытуемого раствора при одинаковой толщине слоев обоих растворов (испытуемого и стандартного), при одинаковой интенсивности окраски обеих этих Жидкостей также будет содержаться 2 мг холестерина; 25 мл испытуемого раствора, содержащего 2 мг хо лестерина, получено от обработки 1 мл желчи; значит, в 100 мл желчи будет 2 • 100 = 200 мг холестерина.

При разной толщине слоев жидкости в момент одинаковой интенсивности их окраски количество холестерина равно произведению 200 на число, полученное от деления толщины слоя стандартной жидкости на толщину слоя испытуемой жидкости. Например: при колориметрировании испытуемой жидкости X стандартный раствор в колориметре установлен на 24. Одинаковый цвет жидкостей получен при отметке на шкале 20. Следовательно, количество холестерина 240 мг%.

- Читать далее "Определение липазы панкреатического сока. Определение трипсина панкреатического сока"

Оглавление темы "Исследование содержимого желудка и двенадцатиперстной кишки":
1. Дефицит соляной кислоты. Реакция с хлорным железом Боаса
2. Определение крови в желудочном содержимом. Определение пепсина
3. Микроскопия желудочного содержимого. Состав желудочного содержимого
4. Исследование промывных вод желудка. Получение промывных вод
5. Взятие дуоденального содержимого. Техника получения содержимого двенадцатиперстной кишки
6. Определение желчных кислот. Определение билирубина и уробилина
7. Определение холестерина желчи. Методика определения холестерина
8. Определение липазы панкреатического сока. Определение трипсина панкреатического сока
9. Определение диастазы панкреатического сока. Методика определения амилазы
10. Микроскопия дуоденального содержимого. Лямблии в двенадцатиперстной кишке