Окраска метиленовой синькой. Для обнаружения базофильной зернистости эритроцитов, встречающейся при тяжелой форме анемии, а также полихромазии, препараты крови окрашивают 1 % водным раствором метиленовой синьки.
Приготовленный 1% водный раствор метиленовой синьки ставят в термостат при температуре 37° на 48 часов.

Для окрашивания препарата надо 5 капель 1% водного раствора метиленовой синьки добавить к 20 мл водопроводной воды, хорошо смешать и полученный раствор налить на фиксированный препарат крови на час, затем смыть водой и высушить на воздухе.

Окраска толстой капли. Высушенную не фиксированную каплю крови на стекле окрашивают тем же раствором, окрашивающим мазки. Наливают на капли краску. Через 2—3 минуты гемоглобин от краски растворяется. Тогда эту краску с капли осторожно сливают и наливают снова свежего раствора на 40— 60 минут. После этого препарат осторожно смывают слабой струей воды, чтобы капля не смылась, и высушивают на воздухе. Получается прозрачный фон, удобный для исследования. При правильном окрашивании препарат имеет красновато-фиолетовый цвет.

Если приходится окрашивать старую каплю или очень толстую, то на высохшую каплю наливают каплю дистиллированной воды, от которой гемоглобин растворяется. Окрашенную воду сливают с препарата, смывают его осторожно водой, после чего препарат становится серовато-белым. Окрашивают его затем обычно раствором краски 40—60 минут.

Окраска ретикулоцитов. Для окрашивания ретикулоцитов каплю насыщенного спиртового раствора бриллиант-крезиловой синьки (1 г на 80 мл абсолютного спирта) наносят на край обезжиренного предметного стекла, быстро размазывают по предметному стеклу, как мазок крови. Краска высыхает быстро, и поверхность стекла приобретает еле заметный синеватый оттенок. На таком стекле делают обычный мазок крови и сразу же кладут на 5—6 минут во влажную камеру (бактериологическая чашка, в которой лежит смоченный водой ватный валик или фильтровальная бумага). Вынутые из влажной камеры препараты высушивают на воздухе и исследуют иммерсией микроскопа.
Стекла, окрашенные бриллиант-крезиловой синькой, сохраняются долго, поэтому их молено приготовить про запас.

Для исследования ретикулоцитов пользуются и водным раствором метиленовой синьки 1 : 500.
На чистое обезжиренное покровное стекло наносят каплю раствора метиленовой синьки, кладут его на высушенный нефиксированный препарат крови и сразу рассматривают иммерсией микроскопа.

Ретикулоциты выявляются также и при окрашивании толстой капли без фиксации, по Романовскому-Гимза. В отличие от зрелых эритроцитов ретикулоциты при окрашивании не выщелачиваются; на фоне протоплазмы они имеют базофильно окрашенную синевато-фиолетовую сеточку.

Примечание. 1. Большое значение для окрашивания препаратов крови имеет качество дистиллированной воды Она должна быть нейтральной. Для проверки в пробирку с 10 мл испытуемой воды опускают несколько крупинок гематоксилина. При нейтральной реакции вода через 1—5 минут окрашивается в светло-фиолетовый цвет. Если вода через 5 минут не становится фиолетовой, ее подщелачивают, прибавляя по каплям 1% раствор углекислого натрия до появления светло-фиолетового цвета (признак нейтральной реакции).

Появление фиолетового цвета воды раньше минуты указывает на щелочную реакцию; для получения нейтральной реакции воду подкисляют прибавлением по каплям 1% раствора уксусной кислоты. По количеству капель, необходимых для получения нейтрализации 10 ли воды, определяют количество щелочи или кислоты для нейтрализации данного количества воды.

Дистиллированную воду нейтрализуют также буферными смесями из 2 растворов: 1) фосфорнокислый натрий двузамещенный (Na2HP04) — 17,838 г в 1 л воды; 2) фосфорнокислый калий однозамещенный (КН2РО4) — 13,614 г в 1 л воды.

Для приготовления этих растворов необходимо пользоваться химически чистыми сухими реактивами. Растворы сохраняются в темном месте. Для большей сохранности следует прибавить в каждый раствор по кристаллику тимола.
Для нейтрализации дистиллированной воды прибавляют на 1 л воды по 5 мл каждого раствора.

2. Все краски для окрашивания крови должны храниться в темном месте и не взбалтываться.
3. Мазки смываются после окраски посредством пипетки либо слабой струей.
4. Мазки должны сушиться на воздухе в вертикально-наклонном положении.
5. В шкафу с красками для крови нельзя хранить щелочи, кислоты.

- Читать далее "Происхождение клеток крови. Эритроциты"