Реакция с красителем Себина — Фельдмана и РСК при токсоплазмозе. Иммунология
Реакция с красителем Себина — Фельдмана. Реакция с красителем в настоящее время считается наилучшей из серологических проб (Д. Н. Засухин). Реакция предложена Себиным и Фельдманом в 1948 г. Сущность ее заключается в том, что протоплазма в паразитах в нормальной сыворотке окрашивается в синий цвет, тогда как в сыворотке, содержащей антитела, этого окрашивания не происходит. Для постановки реакции необходимо иметь живые токсоплазмы. С этой целью в лабораториях поддерживают штаммы токсоплазм на белых мышах путем интраперитонеальных пассажей. Для реакции используют токсоплазмы на 3—4-й день после заражения.
Реакция с красителем Себина — Фельдмана строго специфична при токсоплазмозе и не дает положительных результатов в высоких титрах как при трихомониазе, так и при трипаносомозе. Она достаточно надежна и чувствительна, но точность ее зависит от качества компонентов, участвующих в реакции (от чистоты исследуемой сыворотки, сорта метиленовой синьки, активатора, асцитиче-ской жидкости).
Диагностическим титром реакции с красителем следует считать титр 1 : 64 (Г. А. Орлов, Д. Н. Засухин и С. Г. Васина), однако в типичных для токсоплазмоза клинически выраженных случаях, например при поражении центральной нервной системы, следует учитывать и низкие титры (1:12). Реакция Себина—Фельдмана довольно сложна, а кроме того, требует свежих жизнеспособных паразитов и поэтому не нашла пока широкого применения.
Реакция связывания комплемента. Впервые о ней упоминают в 1937 г. Николау и Равелло (Nicolau, Ravellо). В практику диагностики токсоплазмоза введена в 1942 г. Уореном и Себином. В настоящее время эта реакция получила широкое распространение благодаря ее высокой специфичности [Катье (Cathie); Рот и Пикарский (Roth, Piekarski); Г. А. Орлов, Д. Н. Засухин и С. Г. Васина, В. А. Саляев и А. К. Шустров и др.]. Реакция связывания комплемента основывается на способности комплекса антиген — антитело связывать свободный комплемент.
Комплемент связывается в том случае, когда в испытуемой сыворотке содержатся родственные токсоплазмам антитела. Для выявления этой реакции используется гемолитическая система, состоящая из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки. Гемолиз бараньих эритроцитов происходит только в присутствии комплемента. При положительной реакции связывания комплемента между антигеном (токсоплазмами) и родственными антителами образуется комплекс, связывающий комплемент, и гемолиза бараньих эритроцитов не происходит.
При отрицательной реакции связывания комплемента комплемент из гемолитической системы не адсорбируется и наблюдается гемолиз бараньих эритроцитов. В качестве антигена обычно используется перитонеальный экссудат зараженных белых мышей (В. А. Саляев и А. К. Шустров, Л. И. Грачева). Исследуемые сыворотки инактивируют в течение 30 минут при 56° и разводят 1 : 5.
Перед постановкой реакции комплемент предварительно титруют в присутствии стандартной взвеси токсоплазм для определения антикомплементарных свойств антигена. Титром комплемента считают наименьшее его количество, которое дает полный гемолиз. Основную реакцию ставят с испытуемыми сыворотками; в качестве контроля в опыт берут также три положительные и две отрицательные сыворотки. Ставят два ряда пробирок — опытный и контрольный. Сыворотку наливают в опытную и контрольную пробирки. Антиген наливают только в пробирки опытного ряда, в контрольный ряд вносят только физиологический раствор. Комплемент вносят в пробирки обоих рядов.
Одновременно ставят контроли антигена на антикомилементарность и гемотоксичность. Все пробирки встряхивают и помещают на 16—18 часов в холодильник. После выдерживания в рефрижераторе ко всем пробиркам добавляют гемолитическую систему. Пробирки ставят на 45—60 минут в термостат при 37°. Реакцию читают через 2 часа после 24-часового выдерживания при комнатной температуре. Задержки гемолиза учитывают по четырехкрестовой системе. Четыре креста (++++) — полная задержка гемолиза: надосадочная жидкость бесцветна, на дне плотный осадок эритроцитов (реакция связывания комплемента резко положительна. Три креста (+++) — четкая задержка гемолиза; надосадочная жидкость слабо розового цвета, на дне значительный осадок эритроцитов (реакция связывания комплемента положительна). Два креста ( + +) — частичная задержка гемолиза: надосадочная жидкость интенсивно розового цвета, но осадок эритроцитов на дне ясно виден (реакция связывания комплемента слабо положительна). Один крест ( + ) —слабая задержка гемолиза (реакция связывания комплемента сомнительна). Отрицательный результат — полный гемолиз: осадка нет.
Реакцию связывания комплемента следует считать положительной при задержке гемолиза не менее чем на два креста.
- Ознакомьтесь далее со статьей "Внутрикожная аллергическая проба с токсоплазмином. РПГА и РН при токсоплазмозе"
Оглавление темы "Диагностика и лечение токсоплазмоза":- Лабораторная диагностика токсоплазмоза. Методы выявления токсоплазм
- Реакция с красителем Себина — Фельдмана и РСК при токсоплазмозе. Иммунология
- Внутрикожная аллергическая проба с токсоплазмином. РПГА и РН при токсоплазмозе
- Патологическая анатомия при токсоплазмозе. Морфология токсоплазмоза мозга
- Морфология токсоплазмоза глаз. Патанатомия
- Тяжесть течения токсоплазмоза глаз. Морфология токсоплазмоза зрительного нерва
- Исследование трупа при токсоплазмозе. Морфология
- Лечение токсоплазмоза. Лекарства
- Терапия токсоплазмоза у беременных и детей
- Лечение токсоплазмоза глаз. Препараты