Подтверждение стафилококковой этиологии гнойно-воспалительного заболевания (ГВЗ) проводится не только с диагностической целью, но и для определения чувствительности выделенного штамма к средству этиотропной терапии с последующей ее коррекцией.

При внутрибольничном распространении стафилококка его выделение, идентификация и определение чувствительности к антибактериальным препаратам является необходимым для решения эпидемиологических проблем.

Материалом для исследования служат кровь, гной из абсцессов, гнойное и серозное отделяемое воспалительных очагов, ран, жидкость из серозных полостей, мокрота, моча, слизь из зева и носа, при подозрении на пищевое отравление — пищевые продукты, рвотные массы, промывные воды желудка, а также смывы с рук персонала и предметов окружающей среды.

Первый день исследования. Кровь (около 0,5 мл) берут из вены стерильно. Засевают в специальные жидкие или двухфазные среды для гемокультур. При посеве крови соблюдение правил асептики обязательно не только с целью защиты пациента, но и для предотвращения контаминации питательной среды стафилококком извне.

После инкубации в термостате при 37°С в течение суток из флакона с жидкой средой производится высев в чашки Петри с агаровыми средами, применяющимися для прямого посева материала, исследуемого на стафилококк с последующей идентификацией выделенной культуры.

Смывы с рук персонала, предметов внешней среды, обычно слабо обсемененные стафилококком, засевают для подращивания на тиогликолевый бульон или мясопептонный бульон с 7,5% хлоридом натрия (среда обогащения). Посевы инкубируют в термостате одни сутки, после чего производят высев на специальные плотные питательные среды для выделения стафилококка с последующей идентификацией.

Материал из локальных очагов предварительно микросконируют (кроме слизи из зева, смывов, фекалий) в препаратах-мазках, окрашенных по Граму. Преобладание в препаратах стафилококка среди сопутствующей микрофлоры позволяет предположить, что он является главным этиологическим агентом воспалительного процесса.

Для выделения стафилококка в чистой культуре и изучения его свойств материал высевают в чашки Петри с агаровыми средами, позволяющими получить представление о ряде биологических признаков выделяемой культуры и одновременно подавить рост сопутствующей флоры. К числу таких дифференциально-диагностических сред относится желточно-солевой агар (ЖСА) и молочно-желточно-солевой агар (МЖСА).

В этих средах благодаря наличию желтка, выявляется фермент лецитиназа (лецитинвителлаза); хлорид натрия в повышенной концентрации (7,5%) подавляет рост части сопутствующей флоры, что облегчает выделение чистой культуры. Молоко (10%) способствует лучшему выявлению пигмента колоний стафилококка. При невозможности использовать желточные среды производят посев только на 5% кровяной агар (КА). Последний можно применять наряду с желточной средой (см. 32.2.2.1).

Второй день исследования. Изучают посевы на агаровых средах в чашках Петри. Отмечают цвет выросших колоний (золотисто-желтый, палевый, кремовый, белый). Учитывают ореолы вокруг колоний, свидетельствующие о разложении желтка ферментом лецитиназой. Отмечают наличие или отсутствие зон гемолиза вокруг колоний на КА. Отобранные колонии (иногда разные варианты в одном и том же посеве) отсевают в пробирки со скошенным мясопептонным агаром (МПА) для получения чистых культур; помещают в термостат на одни сутки. В случае применения обогащения на жидкой среде в этот день делают высев в чашки с агаровыми средами.

Третий день исследования. Изучают выросшие на МПА культуры. Готовят препараты-мазки, окрашенные по Граму. Если при микроскопии выявлена чистая культура грамположительных кокков с характерным для стафилококка расположением клеток, ее изучают на предмет идентификации.

Для подтверждения принадлежности культуры к роду Staphylococcus ставят реакцию на каталазу на стекле. При положительной реакции, проявляющейся через несколько минут, культуру отсевают на среду Хью-Лейфсона с глюкозой для выявления ферментации в анаэробных условиях. Учет результатов проводят в течение 1-4 сут. инкубации в термостате. Для получения более быстрого результата, позволяющего ориентировочно отличить культуру стафилококка от каталазоположительных микрококков, отсевают культуру на КА (если этого не было сделано при первичном посеве материала). Микрококки никогда не образуют зон гемолиза в отличие от большинства штаммов стафилококка, особенно S. aureus.

Ставят реакцию плазмокоагуляции и производят ее учет через 1; 2 и 4 ч. Если первичный посев материала был сделан только на КА, пересевают культуру на среду для выявления лецитиназы.

Четвертый день исследования. При отсутствии плазмокоагулазы, но при наличии пигмента и/или лецитиназы для идентификации S.aureus необходимо поставить минимум два теста: на ДНКазу и ферментацию маннита в анаэробных условиях путем посева на среду Хью-Лейфсона с маннитом.

Положительный результат обеих проб или хотя бы одной из них позволяют отнести выделенный штамм к коагулазоотрицательному S. aureus.

Коагулазоположительные культуры кокков, не обладающие ни золотисто-желтым пигментом, ни лецитиназой, ДНКазой и анаэробной ферментацией маннита, к виду S. aureus не относятся.

Культура стафилококка, не являющаяся видом S. aureus, но нередко формирующая белые колонии, может относиться к видам S. epidermidis и S. saprophyticus. Эти представители нормальной флоры кожи и слизистых человека могут иногда вызвать гнойно-септические заболевания у ослабленных лиц, быть агентами внутрибольничной инфекции.

Для их идентификации необходимо поставить три дополнительных теста: на устойчивость к антибиотику новобиоцину дисковым методом, тесты на щелочную фосфатазу и на окисление маннита (путем посева на среду с маннитом и индикатором) в обычных условиях.

Свойства S. epidermidis и S. saprophyticus перечислены в таблице ниже.

- Читать далее "Определение чувствительности к антибиотикам золотистого стафилококка (S. aureus)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 11.11.2019