Фаготипирование позволяет проводить внутривидовую дифференциацию бактерий. Поскольку фаготиповая характеристика бактериальных штаммов достаточно стабильна, фаготипирование чрезвычайно значимо для проведения эпидемиологического анализа. При помощи фагового маркирования представляется возможность установить связи между отдельными случаями заболевания и выявлением источников инфекции, а также путей ее распространения.

Разработаны различные схемы фагодиагностики и фаготипирования для многих видов бактерий — возбудителей брюшного тифа, сальмонеллезов, в том числе паратифов А и В, дизентерии, дифтерии, чумы, холеры, бруцеллеза, для энтеропатогенной кишечной палочки, стафилококков (коагулазопозитивных и коагулазонегативных), стрептококков, микобактерий и др. Существуют международные схемы фаготипирования для возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В, коагулазоположительных стафилококков.

а) Фаготипирование стафилококков. Широкое распространение при изучении стафилококковых инфекций получили диагностические стафилококковые бактериофаги для типирования коагулазопозитивных стафилококков, выделенных от человека (международный набор — Англия) и от крупного рогатого скота (набор Давидсона). Эти наборы содержат по 23 и 7 (соответственно) типов бактериофагов. Типирование осуществляется всеми фагами набора одновременно.

Лиофилизированное содержимое каждой ампулы с типовым фагом растворяют в 1 мл бульона Хоттингера, Мартена или мясопептонном бульоне с 0,4% глюкозы и 0,02% хлористого кальция — основное разведение 10^-1. Далее готовят разведения, соответствующие 1 тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Суточную агаровую культуру испытуемого штамма засевают в пробирку с мясопептонным бульоном, pH 7,2-7,4, (можно использовать бульон Хоттингера или Мартена) и выращивают при 37 °С до появления заметной мути (3-5 ч).

По чашкам Петри разливают 1,2% агар Хоттингера на свежей мясной воде с добавлением 0,4% глюкозы и 0,02% хлористого кальция (последний добавляют непосредственно к готовой расплавленной среде перед розливом по чашкам).

Чашки с застывшим агаром подсушивают 40-60 мин при 37 °С. При помощи пастеровской пипетки бульонной культурой орошают поверхность агара. Избыток культуры удаляют и подсушивают 30-40 мин при 37 °С. Дно засеянной чашки расчерчивают в соответствии с количеством используемых фагов и в каждую часть засеянной среды в определенном порядке наносят каплю соответствующего фага тонко оттянутой пастеровской пипеткой. После подсыхания капель фагов чашку переворачивают и инкубируют 18-20 ч при 30 °С или 5-6 ч при 37 °С и оставляют при комнатной температуре на 18-20 ч.

б) Учет и регистрация результатов. Степень лизиса культуры стафилококка регистрируется по следующей схеме:
++++ — сливной (полный) лизис;
+++ — полусливной (незначительный рост культуры в зоне лизиса);
++ — наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса); + — от 20 до 50 колоний фага;
± — менее 20 колоний фага;
- - полное отсутствие лизиса.

Первые три степени лизиса (++++, +++, ++) называют сильной реакцией. Степень лизиса (+, ±) — слабая реакция.

Штамм стафилококка считается типируемым, если хотя бы один фаг дал сильную реакцию. Если при типировании 1 ТР получены только слабые реакции или лизис отсутствует, то этот штамм исследуют повторно с теми же фагами в разведении 100 ТР.

Стафилококки чаще лизируются несколькими фагами, что позволяет определить характерную для каждого штамма фагомозаику. Если штаммы обнаруживают одну фагомозаику или имеется различие на 1 или 2 сильные реакции, то они идентичны.

в) Фагодиагностика холеры. В нашей стране выпускают бактериофаги для диагностики возбудителей холеры:

а) дифференциально-диагностические фаги для дифференциации холерных вибрионов;

б) диагностические фаги для дифференциации холерных вибрионов 01 группы биоваров Cholerae cholerae и Cholerae eltor;

в) диагностические холерные бактериофаги ТЭПВ - 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 — для фаготипирования и фагодиагностики неагглютинирующих холерной 01 сывороткой энтеропатогенных вибрионов (Cholerae non 01), выделенных от людей и из объектов внешней среды;

г) диагностические холерные монофаги для определения вирулентности вибрионов эльтор, выделенных от носителей и из объектов внешней среды; д) диагностические холерные бактериофаги СТХ + СТХ—для идентификации вирулентных от авирулентных штаммов холерных вибрионов.

г) Определение коли-фагов в воде. В санитарной микробиологии обнаружение коли-фагов в воде является одним из показателей, характеризующих качество очистки питьевой воды и охраны грунтовых вод. Количественное определение коли-фагов проводят на плотных питательных средах двухслойным методом Грациа с индикаторным штаммом Е. coli.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 21.07.2019