Как отмечено выше, фагу присущи выраженные паразитические свойства, обусловливающие существование и размножение только в культурах гомологичных микроорганизмов. На этом основании присутствие бактериофага можно рассматривать как косвенный показатель инфицированности исследуемого материала соответствующим микробом.

В практике микробиологии обнаружение бактериофага производят в том случае, когда выделение культуры микроба не дает положительного результата, например, вследствие чрезмерно малого количества этих микробов в исследуемом материале или при сильном загрязнении его посторонней микрофлорой.

В настоящее время разработаны различные методы качественного обнаружения фага в исследуемом материале. В основу этих методов положен засев исследуемого материала совместно с гомологичным бактериальным штаммом на плотные и жидкие питательные среды. Культуры микробов, чувствительные к бактериофагу, принято называть тест-культурами.

а) Прямой метод выделения бактериофага из исследуемого материала. Исследуемую жидкость фильтруют от микробов. Твердый исследуемый материал (образцы почвы, пищевые продукты, испражнения) предварительно измельчают в ступке, эмульгируют, фильтруют через бумажный, затем через бактериальный фильтры. Наличие фага в полученном фильтрате определяют на плотных или жидких питательных средах.

б) Выделение бактериофага методом обогащения «без подсева». Исследуемый материал засевают в жидкую питательную среду, оптимальную для развития микроорганизмов, против которых ищут бактериофаг. Посевы инкубируют в термостате при оптимальной температуре 18-20 ч. По истечении указанного срока посевы фильтруют через бумажный, а затем через бактериальный фильтры. Полученные фильтраты испытывают на присутствие бактериофага на плотных и жидких питательных средах.

В основу этого метода положен принцип создания наиболее благоприятных условий для размножения находящихся в исследуемом материале бактерий и соответствующего им искомого бактериофага.

в) Выделение бактериофага методом обогащения «с подсевом». Жидкий исследуемый материал непосредственно, а плотный после предварительного измельчения в ступке засевают в мясопептонный бульон или в другую жидкую питательную среду. Одновременно с исследуемым материалом вносят 0,5-1 мл 3-6-часовой бульонной или смыва с суточной агаровой культуры бактерий, гомологичных выделяемому фагу.

Для контроля культуру бактерий, применяемую для обогащения, засевают в стерильную питательную среду.

Посевы ставят в термостат при 37 °С на 18-24 ч. После инкубации из опытной и контрольной пробирок берут по несколько миллилитров жидкости и фильтруют через бактериальные фильтры. Полученные фильтраты исследуют на присутствие бактериофага, гомологичного бактериям, применяемым для обогащения.

Сущность данного метода заключается в предварительном обогащении исследуемого материала клетками того микроорганизма, к которому ищут бактериофаг. Бактерии, внесенные в исследуемый материал, размножаются, и вместе с ними размножается фаг.

- Читать далее "Качественные методы выявления бактериофага"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 21.07.2019