Фазово-контрастная микроскопия и настройка фазового контраста

Неокрашенные микроорганизмы прозрачны для видимого света. При микроскопии неокрашенных микроорганизмов, отличающихся от окружающей среды только по показателю преломления, изменения интенсивности света (амплитуды) не происходит, а изменяется только фаза прошедших световых волн. Поэтому для глаза эти изменения не заметны, и наблюдаемые объекты выглядят малоконтрастными, прозрачными.

Для изучения таких объектов используют фазово-контрастную микроскопию, основанную на преобразовании невидимых фазовых изменений, вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.

Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе, оно состоит из:
1) набора объективов со специальными фазовыми пластинками;
2) фазово-контрастного конденсора с поворачивающимся диском, в котором установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;
3) вспомогательного микроскопа.

Устройство микроскопа
Принципиальная схема микроскопа и осветительной системы:
1 — источник света; 2 — коллектор; 3 — ирисовая полевая диафрагма; 4 — зеркало; 5 — ирисовая аппертурная диафрагма;
6 — конденсор; 7 — препарат; 7' — увеличенное действительное промежуточное изображение препарата, получаемое при помощи объектива; 7" — увеличенное мнимое окончательное изображение препарата, наблюдаемое через окуляр;
8 — объектив; 9 — выходной значок объектива; 10 — полевая диафрагма окуляра; 11 — окуляр; 12 — глаз

Настройка фазового контраста:
1) заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквой Ф или ph);
2) устанавливают объектив малого увеличения; отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой диафрагмы (обозначенное как 0);
3) настраивают свет по Келеру;
4) выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат;
5) поворачивают диск конденсора и устанавливают соответствующую объективу кольцевую диафрагму;
6) вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспомогательный микроскоп; настраивают его так, чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого кольца того же диаметра); при помощи регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца. Вынимают вспомогательный микроскоп и вновь устанавливают окуляр.

Устройство микроскопа

Этот способ микроскопии позволяет резко повысить контрастность живых неокрашенных микроорганизмов, и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст). В России выпускается устройство КФ-4 для позитивного фазового контраста. Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т. п.

В этих случаях часто применяют биологические микроскопы с обратным расположением оптики — так называемые инвертированные микроскопы. У таких микроскопов объективы расположены снизу, а конденсор — сверху. За изобретение фазово-контрастной микроскопии его автор голландский физик Цернике был удостоен Нобелевской премии.

- Читать далее "Темнопольная микроскопия и настройка темнопольного освещения"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 9.05.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.