Неокрашенные микроорганизмы прозрачны для видимого света. При микроскопии неокрашенных микроорганизмов, отличающихся от окружающей среды только по показателю преломления, изменения интенсивности света (амплитуды) не происходит, а изменяется только фаза прошедших световых волн. Поэтому для глаза эти изменения не заметны, и наблюдаемые объекты выглядят малоконтрастными, прозрачными.

Для изучения таких объектов используют фазово-контрастную микроскопию, основанную на преобразовании невидимых фазовых изменений, вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.

Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе, оно состоит из:
1) набора объективов со специальными фазовыми пластинками;
2) фазово-контрастного конденсора с поворачивающимся диском, в котором установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;
3) вспомогательного микроскопа.

Настройка фазового контраста:
1) заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквой Ф или ph);
2) устанавливают объектив малого увеличения; отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой диафрагмы (обозначенное как 0);
3) настраивают свет по Келеру;
4) выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат;
5) поворачивают диск конденсора и устанавливают соответствующую объективу кольцевую диафрагму;
6) вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспомогательный микроскоп; настраивают его так, чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого кольца того же диаметра); при помощи регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца. Вынимают вспомогательный микроскоп и вновь устанавливают окуляр.

Этот способ микроскопии позволяет резко повысить контрастность живых неокрашенных микроорганизмов, и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст). В России выпускается устройство КФ-4 для позитивного фазового контраста. Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т. п.

В этих случаях часто применяют биологические микроскопы с обратным расположением оптики — так называемые инвертированные микроскопы. У таких микроскопов объективы расположены снизу, а конденсор — сверху. За изобретение фазово-контрастной микроскопии его автор голландский физик Цернике был удостоен Нобелевской премии.

- Читать далее "Темнопольная микроскопия и настройка темнопольного освещения"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 9.05.2019