а) Индикаторы. В состав диагностических питательных сред часто входят различные индикаторы, позволяющие по изменению цвета среды определить образование кислоты или щелочи при ферментативной активности микроорганизмов. Для этого нужно подобрать соответствующий задаче pH-индикатор и убедиться, что он не подавляет рост микроорганизма.

В качестве индикаторов обычно используют нейтральный красный, бромтимоловый синий, бромкрезоловый синий, бромкрезоловый пурпурный, конго красный, смесь розоловой кислоты и водно-голубого, индикатор Андреде. Все рН-индикаторы плохо растворимы в воде и вводятся в среды в очень низких концентрациях (менее 0,01%).

б) Ингибиторы роста. Ингибиторы роста микроорганизмов могут вноситься в среды совместно с питательными компонентами (пептоном, агаром) или добавляться целенаправленно для подавления сопутствующей флоры. Они могут быть различной природы.

Жирные кислоты иногда содержатся в пептоне, агаре и др. Для их удаления в среды добавляют вещество, связывающее жирные кислоты, — 0,15% активированного угля, 0,15% растворимого крахмала или 10% (по объему) сыворотки. Значительным ингибирующим эффектом обладают глюкозофосфаты, образующиеся в процессе нагревания среды.

В средах, подвергнутых ультрафиолетовому облучению или находящихся на свету (светочувствительных), либо после стерилизации автоклавированием обнаруживаются перекиси. Содержание их в питательных средах варьирует, вследствие чего в одних случаях ингибируется рост штаммов, не содержащих каталазу, а в других не растут даже штаммы, продуцирующие ее.

Для выявления патогенных бактерий необходимо подавить рост сопутствующей микрофлоры. С этой целью в среды добавляют различные селективные ингибиторы роста. Для угнетения роста грамотрицательных микроорганизмов вводят тетратионат натрия и калия, теллурит калия, ацетат таллия, сульфат таллия, селенит натрия. Для угнетения роста грамположительных — анилиновые красители (бриллиантовый зеленый, кристаллический фиолетовый, этиловый фиолетовый, анилиновый синий).

Желчь и соли желчных кислот вводят в состав сред для выращивания патогенных энтеробактерий. Смесь желчных кислот, получаемая в результате щелочного гидролиза желчи, входит в состав среды Плоскирева. За рубежом в состав селективных сред вводят соли отдельных желчных кислот, в основном дезоксихолат натрия.

в) Компоненты питательных сред целевого назначения. В состав питательных сред могут входить различные органические и неорганические вещества целевого назначения. Некоторые аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин, глутаминовая кислота) вводятся в состав сред для определения декарбоксилазной активности микроорганизмов, цистин — для определения цистиназы и в качестве стимулятора, триптофан — для определения индоло-образования, фенилаланин — для определения дезаминазы, мочевина — для определения уреазной активности, соли лимонной, малоновой и винной кислот — для определения способности микробов утилизировать эти соединения как единственный источник углеродного питания; О-нитрофенил β-D-галактопиранозид — для определения фермента галактозидазы.

Желток яиц используется в качестве субстрата для определения лецитиназы и липазы, желатин — для выявления протеолитических ферментов, соли железа — для определения сероводорода.

г) Восстанавливающие вещества. Восстанавливающие вещества добавляют в среды, предназначенные для культивирования анаэробных микроорганизмов, чтобы снизить окислительновосстановительный потенциал (Eh) и сбалансировать его на оптимальном уровне. Eh — это мера способности раствора отдавать или принимать электроны. Обычно восстанавливающий агент добавляют к средам перед постановкой опыта.

При культивировании анаэробов в качестве восстановителей обычно используют 0,1% раствор тиогликолята натрия, 0,1% раствор цистеина, 0,1% раствор аскорбиновой кислоты, 0,025% раствор сульфида натрия. Для снижения Eh могут также использоваться органические восстановители L-тирозин и глютатион и неорганические — гидросульфит натрия (Na₂S₂O₄), гексацианоферроат калия и различные сульфиды.

- Читать далее "Отвердители питательных сред: агар, желатин, силикагель"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 18.05.2019