а) Получение дефибринированной крови. Кровь животного сливают в стерильную колбу со стеклянными бусами и непрерывно в течение 15 мин встряхивают. В результате встряхивания находящийся в крови фибрин выпадает в осадок, обволакивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу или пробирку, утрачивает способность свертываться.

б) Приготовление взвеси эритроцитов. Для освобождения от пленок фибрина дефибринированную кровь фильтруют через трехслойный марлевый фильтр. Фильтрат наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 10-15 мин. Эритроциты оседают на дно пробирки, а прозрачная слегка желтоватого цвета плазма образует надосадочный слой.

После центрифугирования уровень жидкости в пробирке отмечают карандашом, отделяют плазму пастеровской пипеткой, эритроциты промывают, доливая до метки стерильный изотонический раствор натрия хлорида, и вновь центрифугируют.

Промывание эритроцитов с добавлением свежего раствора производят 2-3 раза, чтобы последняя порция промывной жидкости была бесцветной.

Из промытых эритроцитов готовят 3 или 5% взвесь, прибавляя к 3-5 мл эритроцитов соответственно 97 и 95 мл изотопического раствора хлорида натрия (для получения меньших количеств взвеси объемы обоих ингредиентов уменьшают в одинаковое число раз).

Взвесь эритроцитов можно хранить в холодильнике при температуре 3-4 °С в течение 5-6 сут.

в) Приготовление сыворотки крови. Кровь, собранную в стерильную пробирку, закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на 20-30 мин в термостат или на водяную баню, отрегулированную на 37 °С, так как в тепле кровь свертывается быстрее и лучше. При свертывании сгусток крови обычно прилипает к стенкам пробирки. Поэтому после выдерживания в термостате или на водяной бане сгусток отделяют от стенок пробирки круговым движением капилляра стерильной пастеровской пипетки, стеклянной палочкой.

После отделения сгустка сыворотку ставят в холодильник при температуре 3-4 °С. В течение 3-4 ч сыворотка отстаивается, и ее собирают, отсасывая стерильной пастеровской пипеткой.

Окрашенную в розовый цвет сыворотку центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 10-15 мин для осаждения форменных элементов крови.

При взятии крови вскоре после кормления животных, а также при повторных кровопусканиях с короткими интервалами иногда возникает липемия, т. е. появление избытка жировых веществ в крови. Сыворотка, получаемая во время липемии, бывает мутная (хилезная), иногда опалесцирующая. Использование такой сыворотки затрудняет чтение диагностических реакций, особенно реакции преципитации.

Во избежание получения мутной сыворотки кровь у животных берут натощак. Просветление липемической плазмы наступает также при введении в кровяное русло животного гепарина, способствующего повышению концентрации в крови фермента, называемого фактором просветления. С этой целью кроликам массой 2-2,5 кг в краевую вену уха вводят за 1-1,5 ч до взятия крови 60 мг гепарина.

Сыворотку крови можно получить методом центрифугирования. В слитой с осадка сыворотке крови через некоторое время после центрифугирования образуется сгусток фибрина, который уплотняется при перемешивании стеклянной палочкой. Затем этот сгусток удаляют. В некоторых случаях фибрин из сыворотки выпадает не полностью. Для удаления остатков фибрина и установления, насколько полно он удален, к сыворотке прибавляют несколько капель тромбина. Освобожденную от фибрина сыворотку фильтруют через асбестовые фильтры. Полученная таким образом сыворотка совершенно прозрачна и не имеет признаков опалесценции.

г) Приготовление цитратной крови. Полученную из сердца или вены кровь сливают в пробирку с 5% раствором цитрата натрия (10 мл крови, 0,5 мл цитрата натрия). Цитратная кровь не свертывается.

д) Приготовление плазмы крови. Цитратную кровь ставят на 18-20 ч в холодильник или центрифугируют. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой жидкости желтоватого цвета — плазмы.

- Читать далее "Умерщвление и вскрытие лабораторных животных"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 10.08.2019