Небольшое количество крови получают у кроликов и морских свинок из вен уха, у мышей и крыс — из вен хвоста, а большое количество — из сердца. В особых случаях прибегают к полному, или тотальному, обескровливанию, после которого животное погибает.

В таблице ниже приведены данные о максимальных количествах крови, которые можно брать у животных, и интервалах времени, через которые процедуру можно повторять.

Для пункции сердца животных фиксируют к доске брюшком кверху. Шерсть в области груди выстригают, кожу обрабатывают спиртовым раствором йода и после этого приступают к пункции сердца, техника исполнения которой, имеет некоторые различия в зависимости от вида животного.

а) Пункция сердца у кроликов. Определяют II пальцем левой руки, обработанным спиртом или смазанным спиртовым раствором йода, сердечный толчок, т. е. точку наиболее сильно выраженной пульсации сердца. Обычно она прощупывается в третьем межреберье. Прокол грудной клетки делают в области сердечного толчка на расстоянии 2-4 мм от левого края грудины, иглу ведут в направлении к средней линии на глубину 2-2,5 см.

При попадании иглы в полость сердца рука, в которой находится шприц, начинает ощущать ритмические толчки, связанные с пульсацией сердца. Поршень шприца легко выдвигается наружу, и в цилиндре его появляется кровь. Взятие крови должно производится по возможности быстрее во избежание ее свертывания. По этой же причине шприц и иглу перед использованием рекомендуется промывать стерильным раствором цитрата или оксалата натрия. Взяв необходимое количество крови, быстрым движением, без рывка, вынимают иглу и на место укола накладывают ватный тампон, пропитанный спиртовым раствором йода.

Животному подкожно вводят подогретый до температуры тела стерильный изотонический раствор хлорида натрия или глюкозу в количестве, равном двойному объему взятой крови. Пункцией сердца можно получить у кролика 25-30 мл крови.

б) Пункция сердца у морских свинок. Кончиками III—IV пальцев левой руки нащупывают точку сердечного толчка, в направлении которого вертикально на глубину 1,5-2 см вкалывают иглу, отступая 1-2 мм от левого края грудины. У морских свинок можно получить данным методом 10-12 мл крови.

в) Пункция сердца у крыс. Как и в предыдущих случаях, пальпаторно определяют место сердечного толчка. На 1 см выше от установленной точки и на 1-2 мм левее от края грудины делают прокол на глубину 1,5-2 см, держа иглу вертикально. Одномоментно у крыс можно получить 6-8 мл крови.

г) Тотальное обескровливание кроликов. Вскрывают одну из сонных артерий, расположенных по обе стороны трахеи. Перед проведением этой операции руки тщательно моют и обрабатывают спиртом или спиртовым раствором йода, все инструменты стерилизуют.

Подготовленного для кровопускания кролика привязывают к станку брюшком вверх, фиксируя голову кольцом к штативу. Шерсть на шее тщательно выстригают, кожу дезинфицируют. К носу животного прикладывают кусочек ваты, смоченной эфиром. После наступления наркоза скальпелем делают разрез по средней линии шеи и разводят края раны пинцетом. Сонные артерии проходят по бокам трахеи в яремном желобке между веной и нервом. Сверху артерия прикрыта грудиноподъязычной и грудинощитовидной мышцами.

Поэтому для обнаружения нервно-сосудистого пучка эти мышцы разделяют тупым концом скальпеля или браншами пинцета. Артерию освобождают от окружающей соединительной ткани и вводят под нее две лигатуры. Ближайшую к голове лигатуру завязывают двойным узлом, позади второй лигатуры на расстоянии 0,3-0,5 см накладывают пеан. Между лигатурой и пеаном маленькими остроконечными ножницами делают продольный разрез сосуда длиной не более 1,5-2 мм, вставляя в него канюлю (стеклянную трубочку с оттянутым капилляром, кончик которого скошен и хорошо оплавлен). Кончик вставленной канюли укрепляют второй лигатурой.

После этого под резиновую трубку, надетую на расширенную часть канюли, подставляют пробирку или флакон и снимают пеан с артерии, чтобы кровь могла вытекать свободно. Обескровливание морских свинок производят так же, как кроликов.

д) Взятие крови из вены уха кроликов. Ухо кролика имеет сильно разветвленную венозную сеть. Для получения крови из вены нужно прежде всего вызвать гиперемию уха, потирая его ладонями рук или слегка ударяя кончиками пальцев. Затем вдоль наружного края уха удаляют пушок и протирают этот участок ватой, увлажненной 70° спиртом. Если в результате всех перечисленных процедур сосуды не инъецируются, ухо опускают в сосуд с водой температурой 48-50 °С на 3-5 мин. После того как сосуды набухнут и четко обозначатся на поверхности ушной раковины, наружную поверхность ее покрывают тонким слоем жидкого парафина (во избежание быстрого свертывания крови) и делают прокол вены.

Для получения небольшого количества крови (менее 1 мл) прокалывают одну из небольших периферических ветвей, а для получения больших объемов крови (5-10 мл) вскрывают краевую вену уха. С этой целью иглу шприца вводят в вену почти параллельно поверхности уха, чтобы не повредить стенки вены. При проколе вены иглой шприца кровь, как правило, выходит отдельными каплями с большими интервалами, и кровотечение прекращается быстро. Для того чтобы вызвать обильное кровотечение, нужно сделать ранку с рваными краями. С этой целью пользуются обломками тонкого капилляра пастеровской пипетки. Из вен уха кролика можно получить до 30 мл крови.

После взятия крови к проколу вены прикладывают на 2-3 мин кусочек сухой стерильной ваты, не нажимая сильно на стенку сосуда, так как при этом кровотечение может усилиться.

Если кровотечение не прекращается, хорошие результаты дает нанесение на ранку нескольких капель перекиси водорода.

е) Взятие крови из вен у морских свинок, крыс и мышей. У морских свинок кровь в количестве 0,3-0,5 мл получают после нанесения насечек на край уха или прокола мягких подушечек лапы.

У белых крыс и мышей для получения 1-3 капель крови приходится прибегать к ампутации кончика хвоста после продолжительного прогревания его в воде температурой 45-50 °С или протирания ксилолом. Взяв кровь, рану прижигают перекисью водорода.

В.М. Концова (1968) предложила способ, позволяющий получить у крыс 0,5-1,0 мл крови из венозного сплетения, лежащего в орбите, позади глазного яблока. Взятие крови производят стеклянной пипеткой с отогнутым капилляром (наружный диаметр 0,6 мм), острие которого отточено под углом 45°. Животное берут I и II пальцами левой руки со стороны спины за шею и слегка сдавливают с боков, вызывая легкое выпячивание глаз. Вращательным движением пипетки делают прокол конъюнктивального мешка в медиальном углу глаза между глазным яблоком и орбитой. После прокола пипетку ведут в направлении гортани на глубину 4-5 мм. Попадание в венозное сплетение сопровождается заполнением капилляра пипетки кровью.

- Читать далее "Получение различных ингредиентов крови лабораторных животных"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 10.08.2019