а) Умерщвление животных. В лабораторной практике приняты способы умерщвления, которые характеризуются простотой приемов и вызывают быструю смерть животного. Мышей, крыс, морских свинок помещают в стеклянную плотно закрывающуюся банку с кусочками ваты, пропитанными хлороформом или эфиром. Животные засыпают и гибнут в течение 3-5 мин. Кроликов умерщвляют посредством воздушной эмболии. Для этого в краевую вену уха по направлению к его основанию вводят иглу шприца. Появление крови в шприце свидетельствует о том, что игла находится в вене. После этого иглу соединяют с пустым 10-граммовым шприцем, поршень которого вытянут до конца. При надавливании на поршень в кровеносную систему животного поступает находящийся в цилиндре шприца воздух, вызывая эмболию и смерть. Забой животных проводят в экспериментальной комнате в отсутствие других здоровых или подопытных животных.

б) Вскрытие животных. Трупы лабораторных животных вскрывают с целью выяснения причин гибели, выделения введенного возбудителя, выявления механизма распространения микробов в организме и места их локализации, изучения патало-гоанатомических изменений, наступающих в результате перенесенной инфекции. Вскрытие трупов животных производят стерильными инструментами, соблюдая правила асептики.

На столе для вскрытия должны находиться широкогорлый сосуд с дезинфицирующим раствором, стерильные ножницы, скальпель, анатомические и хирургические пинцеты, бактериологическая петля, стерильные чашки Петри, пробирки и чашки с питательными средами, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, стерильный изотонический раствор хлорида натрия, ватные тампоны, спички и горелка (спиртовая или газовая). Вскрытие трупов следует проводить таким образом, чтобы предупредить внесение микроорганизмов с поверхности в глубину тканей и перенос микробов из одного органа в другой.

С этой целью рекомендуется вскрывать животных, усыпленных в агональном состоянии, или тотчас после наступления смерти, так как в ближайшие часы после нее проницаемость тканей нарушается, и бактерии из одного органа могут проникать в другой. Особую опасность в этом отношении представляет кишечник, содержимое которого изобилует микробами.

Труп животного брюшком кверху кладут на деревянную доску или лоток с пластинкой застывшего парафина, растягивают пинцетом все четыре лапы и в таком положении фиксируют их булавками или небольшими острыми гвоздиками к поверхности дерева или парафина. Грудь и брюшко протирают ватой, смоченной 5% раствором хлорамина или спиртом, поджигают шерсть, чтобы содержащиеся на ней микробы, в том числе спороносные палочки, не разлетались и не загрязняли стерильные инструменты и органы вскрытого трупа. В процессе вскрытия придерживаются общепринятого порядка. Сначала исследуют наружные покровы и подкожную клетчатку, затем проводят вскрытие, исследование и взятие материала из органов грудной полости, а в последнюю очередь — вскрытие, исследование и взятие материала из брюшной полости.

Обработанную кожу разрезают по средней линии живота протяженностью от симфиза до грудиноключичного сочленения. На уровне передних и задних лап делают боковые надрезы. Кожные лоскуты отсепаровывают от подкожной клетчатки и отворачивают в стороны, прикалывая булавками к доске.

В протоколе вскрытия отмечают состояние подкожной клетчатки и лимфатических узлов в паху и подмышечных впадинах. Подкожная клетчатка может быть развита сильно, слабо или умеренно. Подмышечные и паховые узлы обнаруживаются легко. При осмотре узлов обращают внимание на их величину, форму и цвет. Для бактериологического исследования лимфатические узлы раздавливают стерильным пинцетом и погружают в стерильную питательную среду или втирают в поверхность плотной питательной среды.

Сменив или простерилизовав использованные для вскрытия кожных покровов инструменты, приступают к вскрытию грудной клетки. Грудину, захваченную пинцетом, слегка приподнимают, делают под ней небольшой надрез, вводят в него браншу ножниц и перерезают ребра вначале с одной, а затем с другой стороны. Если в грудной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев. Вновь сменив ножницы или протерев их ватой, смоченной спиртом, разрезают перикард, обнажая поверхность сердца. Накаливают на пламени горелки бранши пинцета или скальпель, прижигают поверхность сердца, затем стерильным пинцетом оттягивают кверху ушко правого предсердия и после этого через прижженное место вводят в полость желудочка или предсердия капилляр пастеровской пипетки. Кровь, поднявшуюся по капилляру пипетки, засевают в питательную среду.

Далее приступают к осмотру органов, расположенных в грудной полости, регистрируя в протоколе имеющиеся в них изменения; например, наличие экссудата в полости плевры, абсцессы, гиперемию (багрово-красное окрашивание) или, наоборот, ишемию (малокровие) в легких. Кусочки легкого с выявленными в нем изменениями вырезают для бактериологического исследования.

После этого, сменив инструменты, переходят к исследованию органов брюшной полости. Передний листок брюшины вскрывают ножницами. При наличии экссудата в брюшной полости делают из него мазок и производят посев на питательную среду. Затем осматривают печень, селезенку, почки, отмечая цвет, величину органов, характеризуя их консистенцию (нормальная, дряблая, уплотненная, хрупкая) и имеющиеся очаги поражения, например, абсцессы.

При локализации инфекционного процесса в желудочно-кишечном тракте делают посев содержимого желудка и кишечника, набирая его в пастеровскую пипетку через прижженную желудочную и кишечную стенки. Таким же образом для посева берут экссудат, содержимое абсцессов, желчного и мочевого пузыря.

Из паренхиматозных органов (печень, почки, селезенка) взятие материала и засев его производят одним из следующих способов:

• обламывают кончик стерильной пастеровской пипетки и проводят ее через пламя горелки. Затем капилляром пипетки прокалывают прижженный участок исследуемого органа и набирают в нее тканевую жидкость, которую засевают на питательную среду. Пипетки после использования опускают в банку с дезинфицирующим раствором;

• прижженную поверхность органа надрезают стерильным скальпелем и из глубины надреза соскабливают бактериальной петлей небольшое количество материала, которое затем вносят в питательную среду;

• на прижженной поверхности органа делают надрез, остроконечными ножницами из глубины его вырезают маленький кусочек, раздавливают между брашнами пинцета и опускают в жидкую питательную среду или срезом кусочка делают отпечатки на поверхности плотной питательной среды.

Изменения, обнаруженные при вскрытии трупа, а также результаты бактериологического исследования вносят в протокол вскрытия и бактериального исследования трупного материала, составленный примерно по такому образцу:
- вид лабораторного животного, взятого в опыт;
— время заражения (месяц, число, час);
— материал, примененный для заражения (взвесь микробов с плотной питательной среды, бульонная культура, взвесь патологического материала и т.д.);
— время гибели животного (месяц, число, час);
— изменения, обнаруженные при вскрытии животного в месте введения заразного материала, состояние подкожной клетчатки, лимфатических узлов, изменения, найденные во внутренних органах;
— вид микроба, выделенного из трупного материала, его основные морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства.

После вскрытия трупы животных складывают в металлические бачки с плотно закрывающимися крышками и засыпают сухой хлорной известью. Трупы мелких лабораторных животных можно заливать раствором различных дезинфицирующих веществ: 5% раствором карболовой кислоты, 3-5% мыльно-карболовым раствором, 3-5% раствором хлорамина. Трупы животных, погибших от заражения споровыми формами микробов, заливают хлорно-известковым молоком или 5-10% осветленным раствором хлорной извести. В дезинфицирующем веществе трупы животных хранят до момента их сжигания.

- Читать далее "Определение вирулентности микробов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 10.08.2019