Микробиологическое исследование таких клинических материалов, как спинномозговая жидкость (СМЖ), кровь, экссудат, гной, мокрота, раневое отделяемое, начинается обычно с микроскопии нативных мазков. Результаты микроскопии в подавляющем большинстве случаев недостаточны для постановки этиологического диагноза, но дают возможность получить ориентировочное представление о количестве содержащихся в клиническом материале микроорганизмов и их принадлежности к палочковидной или кокковой микрофлоре.

В случае же применения окраски по Граму с первых шагов обследования больного определяется дальнейший ход исследования, целью которого является выделение и видовая идентификация этиологического фактора. Кроме того, полученные сведения ориентируют врача на наиболее целесообразную эмпирическую антибактериальную терапию в период до получения конкретных данных, позволяющих назначить рациональную терапию, основанную на применении препаратов, к которым выделенные микробные культуры наиболее чувствительны.

Для определения формы и подвижности бактерий последние получают из свежевыделенной культуры и исследуют в живом состоянии в препаратах «раздавленной» или «висячей» капли.

а) Раздавленная капля. Для приготовления препарата раздавленной капли используются хорошо обезжиренные стекла, так как на поверхности пыльных и жирных стекол микробные клетки не фиксируются.

Для проверки чистоты стекла достаточно нанести на него каплю водопроводной воды или изотонического раствора натрия хлорида. На чистом стекле капля свободно растекается по всей его поверхности, на жирном — дробится на множество мелких капель.

Для обезжиривания стекла его поверхность натирают кусочком сухого мыла, а затем тщательно, до блеска, протирают марлей. Для продолжительного хранения чистые обезжиренные стекла помещают в банки со смесью Никифорова*. Раздавленную каплю можно приготовить из различных материалов.

1. Каплю бульонной культуры бактериологической петлей диаметром 3-4 мм или стерильной пастеровской пипеткой наносят на середину предметного стекла. При обильном росте микроорганизмов культуру предварительно разводят изотоническим раствором натрия хлорида. Покровное стекло ставят ребром у края капли и медленно опускают, как бы выдавливая воздух между предметным и покровным стеклами. Для того чтобы избежать образования пузырьков воздуха, стекла плотно прижимают друг к другу, и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла.

2. При изготовлении препаратов с плотных питательных сред на предметное стекло наносят каплю водопроводной воды или изотонического раствора натрия хлорида. Бактериологической петлей эмульгируют в ней небольшое количество материала, взятого из колонии, которая по культуральным признакам подозревается как возбудитель болезни. Далее препарат готовят так же, как из культуры с жидкой среды.

Аналогичным образом готовят препараты раздавленной капли из осадков центрифугата мочи, СМЖ, экссудата, оставшихся после посева. Если жидкость очень мутная, ее разводят водой или раствором натрия хлорида.

Микроскопируют препарат с объективом 40х или 50х. Хорошие результаты дает микроскопия в темном поле. Но для темнопольной микроскопии толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм, а покровных — 0,2 мм.

Недостаток метода «раздавленной» капли — быстрое высыхание препаратов, поэтому их надо либо микроскопировать сразу после изготовления, либо хранить во влажных камерах (чашках Петри, на дно которых положено 2-3 листка влажной фильтровальной бумаги, а поверх — еще 2 листка).

б) Висячая капля. Для приготовления препарата висячей капли необходимы так называемые максимовские стекла с углублением (лункой) в середине поверхности стекла.

На середину хорошо обезжиренного покровного стекла наносят небольшую четко ограниченную каплю бульонной культуры или микробной взвеси в изотоническом растворе натрия хлорида. Затем покровное стекло быстро переворачивают, чтобы нанесенная на него капля материала не растеклась по поверхности, а совпала с наиболее углубленной центральной частью лунки и «висела» бы свободно, не касаясь ее дна. Иногда поступают иначе: каплю материала покрывают предметным стеклом с лункой. Для создания в камере герметичных условий края, лунки смазывают вазелиновым маслом. Капля во влажной герметической камере испаряется медленно, поэтому препарат долгое время остается пригодным для микроскопии.

Висячую каплю микроскопируют с плоским зеркалом и суженой диафрагмой. При малом увеличении (8х) находят край капли, отчетливо видимый в затемненном поле зрения. По одну сторону края находится множество мельчайших капелек, осевших на внутренней поверхности стекла, по другую сторону края фон равномерно серого цвета — искомая капля. Найденный край капли устанавливают в центре поля зрения и, не сдвигая аппарата, переходят на объектив 40х или иммерсионную систему, слегка расширив диафрагму микроскопа.

Неподвижные микробы в препаратах раздавленной и висячей капли создают картину броуновского движения; подвижные — проходят с одинаковой скоростью большие пространства, в некоторых случаях — через все поле зрения, вращаясь вокруг своей оси.

- Читать далее "Методика приготовления мазков для окрашивания"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.05.2019