Техника окраски кислотоустойчивых микобактерий по методу Циля — Нильсена, Бунге — Траутенроту, Козлова

Кислотоустойчивыми называют микробы, которые будучи окрашенными карболовым фуксином не обесцвечиваются под действием концентрированных минеральных кислот. Особенностью микробов этой группы является то, что они плохо воспринимают окраску. Это свойство обусловлено наличием в клеточной стенке и цитоплазме кислотоустойчивых бактерий длинных цепочек жирных миколовой, туберкулостеариновой и других кислот с 50-100 атомами, которые делают клеточную стенку микроорганизма непроницаемой для кристаллвиолета и других красителей.

Поэтому, чтобы обеспечить проникновение краски в клеточную стенку этих бактерий, приходится применять более концентрированные растворы красок в подогретом состоянии, добавлять в них детергенты и удлинять сроки окраски. После того как краска введена в клетку, ее нельзя обесцветить обычными кислотными и спиртовыми растворителями.

Для окрашивания кислотоустойчивых бактерий применяют обычно метод Циля — Нильсена и некоторые другие модифицированные методы.

а) Окраска по методу Циля — Нильсена:
• Фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают в течение 3-5 мин раствором карболового фуксина Циля или окрашенной фуксином бумагой с подогреванием до появления паров, но не доводя краситель до кипения.
• Дают препарату остыть, бумагу снимают, сливают избыток красителя, препарат промывают водой.
• Окрашенный препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение 3-5 с или 95% этиловым спиртом, содержащим 3% по объему хлористоводородной кислоты (НС1), несколько раз погружая предметное стекло с мазком в стаканчик с солянокислым спиртом.
• После обесцвечивания остаток кислоты сливают и тщательно промывают препарат водой.
• Докрашивают дополнительно водным раствором метиленового синего Леффлера 3-5 мин.
• Окрашенный препарат промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

При окраске препаратов по методу Циля — Нильсена кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвет и не обесцвечиваются кислотой. Некислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты обесцвечиваются и приобретают цвет дополнительного красителя.

б) Окраска по Бунге — Траутенроту:
• Стекло с нанесенным на него мазком погружается на 3 ч в абсолютный спирт для извлечения жирных кислот.
• По истечении указанного срока стекло извлекают из спирта и погружают на 15 мин в 1N хромовую кислоту (Н2CrO4), а затем промывают водой.
• Окрашивают при подогревании карболовым фуксином.
• В течение 3 мин обесцвечивают 10% серной кислотой.
• Докрашивают в течение 5 мин насыщенным спиртовым раствором метиленового синего.

Метод Бунге — Траутенрота применяется для окрашивания осадка мочи при дифференциации М. tuberculosis, окрашенных в малиновый цвет, и менее кислотоустойчивых М. smagmatis, приобретающих синий цвет дополнительной окраски.

в) Окраска зернистых форм М. tuberculosis по методу Козлова:
• Мазок из культуры микробов фиксируют над пламенем горелки. Мазки из клинического материала (мокроты, ткани органов, пораженных туберкулезом) фиксируют жидкостью Карнуа, Буэна или другими химическими фиксаторами.
• Фиксированный мазок высушивают на воздухе.
• Высушенный мазок погружают для окрашивания в склянку со смесью Козлова на 45 мин.
• Окрашенный мазок промывают водопроводной водой.
• Обрабатывают раствором Люголя 20 с.
• Промывают водопроводной водой 2-3 с.
• Докрашивают 0,1% раствором сафранина 1-2 мин.
• Промывают препарат водопроводной водой, дают ему высохнуть и микроскопируют.

Кислотоустойчивые бактерии при окраске этим методом приобретают фиолетовый цвет, остальные микроорганизмы — малиново-красный. В микобактериях туберкулеза определяется отчетливо выраженная зернистость.

Красители для окрашивания мазков

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.05.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.