Кислотоустойчивыми называют микробы, которые будучи окрашенными карболовым фуксином не обесцвечиваются под действием концентрированных минеральных кислот. Особенностью микробов этой группы является то, что они плохо воспринимают окраску. Это свойство обусловлено наличием в клеточной стенке и цитоплазме кислотоустойчивых бактерий длинных цепочек жирных миколовой, туберкулостеариновой и других кислот с 50-100 атомами, которые делают клеточную стенку микроорганизма непроницаемой для кристаллвиолета и других красителей.

Поэтому, чтобы обеспечить проникновение краски в клеточную стенку этих бактерий, приходится применять более концентрированные растворы красок в подогретом состоянии, добавлять в них детергенты и удлинять сроки окраски. После того как краска введена в клетку, ее нельзя обесцветить обычными кислотными и спиртовыми растворителями.

Для окрашивания кислотоустойчивых бактерий применяют обычно метод Циля — Нильсена и некоторые другие модифицированные методы.

а) Окраска по методу Циля — Нильсена:
• Фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают в течение 3-5 мин раствором карболового фуксина Циля или окрашенной фуксином бумагой с подогреванием до появления паров, но не доводя краситель до кипения.
• Дают препарату остыть, бумагу снимают, сливают избыток красителя, препарат промывают водой.
• Окрашенный препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение 3-5 с или 95% этиловым спиртом, содержащим 3% по объему хлористоводородной кислоты (НС1), несколько раз погружая предметное стекло с мазком в стаканчик с солянокислым спиртом.
• После обесцвечивания остаток кислоты сливают и тщательно промывают препарат водой.
• Докрашивают дополнительно водным раствором метиленового синего Леффлера 3-5 мин.
• Окрашенный препарат промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

При окраске препаратов по методу Циля — Нильсена кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвет и не обесцвечиваются кислотой. Некислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты обесцвечиваются и приобретают цвет дополнительного красителя.

б) Окраска по Бунге — Траутенроту:
• Стекло с нанесенным на него мазком погружается на 3 ч в абсолютный спирт для извлечения жирных кислот.
• По истечении указанного срока стекло извлекают из спирта и погружают на 15 мин в 1N хромовую кислоту (Н₂CrO₄), а затем промывают водой.
• Окрашивают при подогревании карболовым фуксином.
• В течение 3 мин обесцвечивают 10% серной кислотой.
• Докрашивают в течение 5 мин насыщенным спиртовым раствором метиленового синего.

Метод Бунге — Траутенрота применяется для окрашивания осадка мочи при дифференциации М. tuberculosis, окрашенных в малиновый цвет, и менее кислотоустойчивых М. smagmatis, приобретающих синий цвет дополнительной окраски.

в) Окраска зернистых форм М. tuberculosis по методу Козлова:
• Мазок из культуры микробов фиксируют над пламенем горелки. Мазки из клинического материала (мокроты, ткани органов, пораженных туберкулезом) фиксируют жидкостью Карнуа, Буэна или другими химическими фиксаторами.
• Фиксированный мазок высушивают на воздухе.
• Высушенный мазок погружают для окрашивания в склянку со смесью Козлова на 45 мин.
• Окрашенный мазок промывают водопроводной водой.
• Обрабатывают раствором Люголя 20 с.
• Промывают водопроводной водой 2-3 с.
• Докрашивают 0,1% раствором сафранина 1-2 мин.
• Промывают препарат водопроводной водой, дают ему высохнуть и микроскопируют.

Кислотоустойчивые бактерии при окраске этим методом приобретают фиолетовый цвет, остальные микроорганизмы — малиново-красный. В микобактериях туберкулеза определяется отчетливо выраженная зернистость.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.05.2019