Методы окраски спор бактерий

Споры имеют вид образований округлой или овальной формы, находящихся в теле микробной клетки. Различают три вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное — спора находится в центре тела микроба; субтерминальное — спора располагается ближе к одному из ее концов; терминальное — спора располагается на конце палочки. Диаметр споры может не превышать диаметра тела микробной клетки, и форма палочки при спорообразовании не изменяется (бациллы). В других случаях диаметр споры больше поперечного размера микробной клетки, и тело ее в месте образования споры утолщается (клостридии).

Форма, величина и расположение спор постоянны для каждого вида бацилл. В отличие от вегетативной части клетки, споры содержат значительно меньше свободной воды и большое количество липидов и кальция. Плотная оболочка спор, непроницаемая для воды, окрашивается с большим трудом, поэтому при обычных методах окраски споры имеют вид неокрашенных пустот внутри клетки. Для окраски спор пользуются специальными методами с применением протрав (кислоты или щелочи). Протравы разрыхляют оболочку споры, облегчая проникновение в нее красителя. Окрасившиеся споры обладают кислотоустойчивостью, в отличие от вегетативного тела микробной клетки, обесцвечивающегося под действием кислоты. Поэтому принцип окраски спор и кислотоустойчивых бактерий одинаков: препарат окрашивают основным красителем, затем обесцвечивают кислотой и докрашивают дополнительно в какой-нибудь контрастный цвет.

а) Окраска спор методом Ожешко:
• На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5% раствора хлористоводородной кислоты (НСl) и подогревают 1-2 мин над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.
• Остывший препарат промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки.
• Окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием до появления паров.
• Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение нескольких секунд.
• Промывают водой.
• Докрашивают метиленовым синим Леффлера или 1% водным раствором малахитового зеленого 3-5 мин.

Окрашенные споры имеют рубиново-красный цвет, вегетативные тела микробных клеток приобретают цвет дополнительного красителя — голубой при применении метиленового синего или зеленый при использовании малахитового зеленого.

Споры бактерий
Споры, обнаруживаемые при помощи светового микроскопа:
a — Bacillus cereus: удлиненные субтерминальные споры (окраска нигрозином);
б — Clostridium pectinovorum: большие терминальные споры внутри спорангиума и отдельные споры без спорангиума (окраска йодом на гранулезу).

б) Окраска спор методом Пешкова:
• На фиксированный мазок наливают метиленовый синий Леффлера, дают краске закипеть. Окрашивание мазка кипящим красителем производится в течение 20-30 с.
• Препарат промывают водой.
• Докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного в течение 30-60 с.
• Промывают водой и высушивают.

Споры, окрашенные метиленовым синим Леффлера, имеют голубой цвет, вегетативные тела бактерий — красный.

в) Окраска спор методом Дорнера:
• Исследуемый мазок высушивают на воздухе.
• Фиксируют над пламенем горелки.
• Покрывают кусочком фильтровальной бумаги, пропитанной карболовым фуксином Циля, поддерживая влажное состояние фильтровальной бумаги добавлением красителя. Мазок подогревают над пламенем горелки 10 мин или помещают стекла на штатив, расположенный над емкостью с кипящей водой.
• Удаляют фильтровальную бумагу и наносят на мазок смесь Никифорова на 1 мин.
• Мазок промывают водопроводной водой, подсушивают фильтровальной бумагой.
• На предметное стекло с мазком наносят насыщенный раствор нигрозина (рецепт 31).

После окраски вегетативные тела остаются бесцветными, а споры приобретают красный цвет. Микробные тела находятся на черном фоне.

- Читать далее "Способы выявления и окраски капсул микробов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 16.05.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.