В цитоплазме некоторых видов бактерий содержатся включения в виде гранул гликогена, полисахаридов, поли-β-масляной кислоты и волютина — полифосфата. Волютин накапливается при избытке питательных веществ в окружающей среде. В клетке он выполняет роль запасных веществ для питания и энергетических потребностей. Волютин имеет большое дифференциальнодиагностическое значение, поскольку среди патогенных микробов обнаруживается с большим постоянством только у С. diphteriae и Р. mallei.

Зерна волютина обладают метахромазией и легко выявляются при специальных методах окраски.

а) Окраска зерен волютина методом Раскиной:
• На мазок, высушенный на воздухе, предварительно не фиксированный, наливают красящую смесь Раскиной.
• Предметное стекло с препаратом нагревают на пламени горелки до полного сгорания спирта.
• Препарат промывают водой.
• Высушивают и микроскопируют.

Бактерии окрашиваются в светло-красный цвет, зерна волютина — в темновишневый.

б) Окраска ядерного вещества по методу Романовского—Гимзы. Предлагаемый способ относится к сложным методам окраски. Применяют его главным образом при микроскопии мазков-отпечатков из органов, мазков крови.
• Приготовленный препарат высушивают на воздухе.
• Фиксируют жидкостью Карнуа или смесью Никифорова.
• Фиксированные мазки подсушивают на воздухе.
• Окрашивают рабочим раствором Романовского—Гимзы. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды (pH 7,0-7,2) добавляют 10 капель коммерческого красителя Романовского — Гимзы. Приготовленный раствор тотчас наливают на предметное стекло с окрашиваемым мазком либо стекло погружают в стаканчик с красителем.
• Через 1 ч краситель сливают.
• Препарат промывают дистиллированной водой (pH 7,0-7,2).
• Готовый препарат высушивают на воздухе и микроскопируют.

Краситель Романовского — Гимзы, имеющий в растворе сине-фиолетовый цвет, окрашивает протоплазму форменных элементов ткани в голубовато-синий цвет, а ядра клеток — в фиолетово-красный. Тела микробных клеток также приобретают фиолетово-красный цвет.

При использовании красителя Романовского — Гимзы дистиллированная вода, применяемая для разведения краски и промывания препарата, должна иметь нейтральную реакцию, так как от значения pH воды зависят результаты окрашивания препарата.

- Читать далее "Окраска клеточной стенки, жгутиков микроорганизмов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 16.05.2019