Биологические тесты. Тест вылупления личинок из яиц гельминтов (Р.С. Кармалиев, 1991). Технически наиболее просто выполним. Яйца гельминтов (стронгилят) культивируют в растворах с различными концентрациями антигельминтика при температуре 27 °С в течение 24 ч. Вылупление личинок из яиц гельминтов резистентного штамма происходит при повышенных концентрациях препарата по сравнению с чувствительным штаммом.

Концентрация лекарственного вещества, необходимая для гибели 50 % яиц (ЛК5о), является количественным показателем чувствительности данного штамма гельминтов к этому препарату. Величину фактора резистентности (ФР) определяют соотношением ЛД50 резистентного штамма к тестируемому. Если ФР больше 1, то тестируемый штамм гельминтов является чувствительным к данному антигельминтику, если равен 1 - устойчивым.

Для того, чтобы результаты были точными, необходимо брать культуру яиц на начальной стадии эмбриогенеза, так как препараты из группы бензимидазолов ингибируют развитие зародыша на ранней стадии, а далее он менее чувствителен к ним.

Тест паралича личинок. Этот тест используют для антигельминтиков, обладающих паралитическим действием. Инвазионных личинок нематод выдерживают в растворах с различной концентрацией антигельминтика при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем личинок исследуют под микроскопом и классифицируют как нормальные или парализованные. Чувствительность гельминтов к антигельминтику выражается в ЛК50, вызывающей паралич 50 % личинок этого штамма.

Для определения антигельминтной резистентности паразитических нематод в условиях «in vitro» в «Тесте паралича личинок» можно использовать специальное устройство «Звездочка», разработанное В.Ф. Никитиным и Павласеком. Предварительно инвазионных личинок нематод получают из фекалий животных при помощи этого устройства. Для постановки теста готовится раствор антигельминтика в разной концентрации. Затем в одну чашку Петри вносят раствор антигельминтика, а в другую — равный объем воды (контроль). Во все чашки вносят по 2 мл взвеси инвазионных личинок гельминтов условно резистентных и чувствительных штаммов в концентрации не менее 100 личинок в 2 мл. Личинок выдерживают в растворах антигельминтика 24 ч при комнатной температуре. Подсчитывают все 100 личинок, дифференцируют их как жизнеспособные (подвижные) и парализованные (без заметного движения в течение 5 с) и устанавливают летальную концентрацию (ЛК5о) препарата, которая вызывает паралич у 50 % личинок гельминтов.

Кроме того, можно использовать и другие тесты:
- тест развития личинок до инвазионной стадии;
- тест развития инвазионных личинок до половозрелых особей;
- тест паралича личинок с использованием микроизмерителя подвижности;
- тест паралича личинок с использованием эзерина;
- тубулин связывающий тест.

Биохимические тесты. Антигельминтное действие некоторых лекарственных препаратов обусловлено их ингибирующим действием на ферменты гельминтов. У большинства гельминтов ключевыми ферментами энергетического метаболизма являются фумаратредуктаза и малатдегидрогеназа. Эти ферменты являются специфически уязвимыми при химиотерапевтическом воздействии препаратов. Степенью их чувствительности к антигельмин-тикам обуславливается чувствительность или резистентность гельминтов к лекарственным веществам.

Основываясь на том, что у резистентных гельминтов активность неспецифических эстераз и ацетилхолинэстеразы выше, чем у чувствительных, разработаны тесты определения чувствительности к антигельминтикам по уровням активности этих ферментов:
- тест уровня активности фумаратредуктазы;
- тест уровня активности малатдегидрогеназы;
- тест уровня активности неспецифических эстераз;
- тест уровня активности ацетилхолинэстеразы.

С их помощью определяют резистентность гельминтов к бензимидазолам, левамизолу, авермектинам и другим препаратам.

Методы тестирования антигельминтиков «in vivo»

Критический тест по снижению количества яиц в фекалиях. Эффективность антигельминтика оценивают, сравнивая количество яиц гельминтов в фекалиях до и после лечения опытных животных.

Контрольный тест. Оценку эффективности препаратов проводят через 10-14 сут после их применения, используя метод гельминтологического вскрытия животных и подсчета количества гельминтов от леченых и контрольных животных.

- Читать далее "Профилактика развития резистентности у гельминтов"