Результаты корреляционного анализа, химической модификации, исследования рН-зависимости говорят о том, что двух-и трехвалентные ионы металлов, увеличивая сродство рецепторов к опиоидам, взаимодействуют с отрицательными зарядами фосфатных групп R-O-PO42-. В случае рецепторов в основе процесса регуляции связывания опиоидов ионами металлов лежит их комплексообразование с имидазольной группой.

Поскольку ярко выраженное активирующее влияние имеют только ионы переходных металлов, можно полагать, что для проявления активирующего эффекта существенно наличие у ионов-активаторов d- и f-орбиталей. Полученные в работе результаты позволяют также предположить, что ионы таких металлов, как Са, Mg, Mn, Ni, Co, являются эндогенными регуляторами функционирования опиоидных рецепторов в живом организме.

Исследование биохимии и фармакологии энкефалинов, эндорфинов и опиатов требует разработки и применения высокоспецифических и чувствительных методов анализа этих соединений. Одним из таких методов является радиорецепторный метод (Ferгага, Li, 1980; Labella, 1982; Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985; Зайцев, Сергеева, Варфоломеев, 1985). Радиорецепторный метод анализа основан на конкурентном ингибировании анализируемым соединением связывания меченого лиганда со специфическими к нему мембранными рецепторами.

Следствием применения мембранных препаратов рецепторов являются:
1) высокая чувствительность радиорецепторного метода, связанная с высоким сродством рецепторов к своим лигандам;
2) высокая его специфичность, обусловленная самой природой рецепторов;

3) доступность мембранных препаратов, содержащих рецепторы: исходным материалом для мембран обычно служит мозг животных; при этом техника выделения мембранных препаратов относительно несложна, поскольку радиорецепторный анализ не требует высокой степени чистоты и гомогенности получаемых препаратов;

4) относительная простота разделения свободного и связанного с мембранами меченого лиганда: являясь достаточно крупными частицами мембраны со связанной с ними меткой, легко отделяются от меченого лиганда в растворе путем вакуумного фильтрования или центрифугирования;

5) возможность дискриминации типа лиганда: выше было показано, что, например, опиоидные рецепторы гетерогенны, поэтому, используя в анализе меченые лиганды той или иной селективности, можно определить, к какому типу лигандов следует отнести данное тестируемое соединение;

6) возможность определения агонист-антагонистической прроды лиганда; являясь частью биохимической системы передачи сигнала, рецепторы в различных средах по-разному взаимодей ствуют с агонисхами и антагонистами: например, для агонистов опиоидных рецепторов известен так называемый натриевый сдвиг - сильное, более чем на порядок, ухудшение IC50 при добавлении солей натрия, в то время как на сродство антагонистов натриевая среда не влияет: влияние ионов натрия на связывани агонист-ангагонистов существенно менее выражено.

- Читать далее "Стабильность рецепторных препаратов. Количественное определение рецепторов"